内镜铜绿假单胞菌生物膜对高水平消毒剂抗性及与qacE△1-sul1基因相关性研究

发布时间：2022-12-05 01:06

　　目的:研究消化内镜铜绿假单胞菌生物膜对邻苯二甲醛、戊二醛和过氧乙酸等临床常用高水平消毒剂的抗性和抗性率,并探讨其与耐消毒剂基因qac E△1-sul1之间的相关性。方法:1.铜绿假单胞菌生物膜的建立将内镜Teflon管道与硅胶返回管、储液瓶、蠕动泵相连,共同形成一个密闭式循环系统进行灌注。2.生物膜活菌计数及观察将铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853菌悬液连续灌注至Teflon管道内,分别在灌注的第2天、第4天和第6天后采用超声振荡法和涡旋振荡法对Teflon管上形成的生物膜进行分离,再取1 m L经梯度稀释后菌悬液接种至营养平板中,计算其在不同培养天数下细菌菌落数。对不同培养天数下生物膜进行电镜扫描观察,最终确定生物膜最佳生长天数。3.试验菌株生物膜对三种消毒剂的抗性及抗性率采用最小抑菌浓度试验和最小杀菌浓度试验分别检测标准菌株ATCC 27853生物膜与22株试验菌株生物膜对三种消毒剂的抗性及抗性率。4.耐消毒剂基因qacE△1-sul1聚合酶链式反应检测采用聚合酶链式反应技术对22株试验菌株分别进行qac E△1-sul1基因检测,分析qac E△1-sul1基因与三种消毒剂... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
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中英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 生物膜对内镜感染暴发的影响
        1.1.2 铜绿假单胞菌生物膜的形成
        1.1.3 铜绿假单胞菌生物膜对高水平消毒剂抗性的研究现状
    1.2 消毒剂基因的研究现状
    1.3 研究目的及意义
    1.4 研究技术路线图
第2章 铜绿假单胞菌生物膜的建立
    2.1 实验仪器与设备
    2.2 方法
        2.2.1 Teflon管制备
        2.2.2 菌悬液制备
        2.2.3 建立密闭式循环灌注系统
        2.2.4 内镜生物膜的形成
        2.2.5 生物膜活菌计数
        2.2.6 生物膜表面电子显微镜扫描观察
        2.2.7 统计学方法
    2.3 结果
        2.3.1 不同培养时间下生物膜平均菌落计数
        2.3.2 不同培养时间下电镜扫描形态(×6000 倍)
        2.3.3 确定铜绿假单胞菌生物膜最佳生长日期
第3章 铜绿假单胞菌生物膜对消毒剂的抗性
    3.1 实验方法
        3.1.1 仪器与设备
        3.1.2 细菌分离鉴定
        3.1.3 中和剂鉴定实验
        3.1.4 最小抑菌浓度试验
        3.1.5 最小杀菌浓度试验
    3.2 结果
        3.2.1 中和剂结果
        3.2.2 MIC值和MBC值的试验结果
    3.3 抗性判定标准
        3.3.1 并联试验抗性结果
        3.3.2 串联试验抗性结果
第4章 耐消毒剂基因qacE△1-sul1 检测
    4.1 实验方法
        4.1.1 仪器与设备
        4.1.2 DNA提取
        4.1.3 基因检测
        4.1.4 扩增体系
        4.1.5 扩增条件
    4.2 结果
        4.2.1 qacE△1-sulI基因阳性结果
        4.2.2 基因测序图
        4.2.3 qacE△1-sul1 基因与试验菌株生物膜对消毒剂抗性的关系
        4.2.4 抗性组与非抗性组与qacE△1-sulI基因比较
第5章 讨论
    5.1 三种消毒剂作用原理及杀菌效果分析
    5.2 试验菌株生物膜对三种消毒剂的抗性
    5.3 细菌生物膜与消毒剂抗性之间的关系
    5.4 试验菌株生物膜与消毒剂qacE△1-sul1 基因之间的关联
    5.5 消毒剂抗性产生的原因及策略
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 创新点
    6.3 局限及展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]内镜清洗消毒效果评价方法研究进展[J]. 徐燕,吴晓松,王玲.  中国消毒学杂志. 2019(05)
[2]VSD联合不同浓度过氧乙酸对糖尿病足创面疗效观察[J]. 王志中,周军利.  甘肃科技. 2019(05)
[3]邻苯二甲醛对细菌芽孢和分枝杆菌杀灭效果研究[J]. 魏兰芬,潘协商,赵永信,李晔,蔡冉,朱一凡.  中国消毒学杂志. 2019(01)
[4]细菌外排泵抑制剂研究进展[J]. 孙影,顾觉奋.  药学进展. 2018(06)
[5]胞外DNA在铜绿假单胞菌生物膜形成中的作用机制[J]. 郑钱梅,韦红.  儿科药学杂志. 2018(06)
[6]细菌对消毒剂的检测方法与耐药机制研究进展[J]. 吴舜,周燕.  海南医学. 2018(08)
[7]上海市90所医院临床病原学标本送检及耐药菌检出现状分析[J]. 林佳冰,高晓东,崔扬文,孙伟,沈燕,史庆丰,陈翔,胡必杰.  中华医院感染学杂志. 2018(08)
[8]清洗环节质量控制对内镜管腔生物膜的影响[J]. 周冬梅,周岩岩,卢玉文.  中国消毒学杂志. 2018(02)
[9]近五年“十大医疗技术危害”对医疗器械应用质量管理工作的启示[J]. 郑小溪,夏凡,刘倪,姜天,王威.  中国医疗器械杂志. 2018(01)
[10]细菌主要外排泵及其调控蛋白研究进展[J]. 高海娇,程古月,王玉莲,宁佳囡,陈婷,李俊,郝海红,袁宗辉.  畜牧兽医学报. 2017(11)

硕士论文
[1]铜绿假单胞菌PA1797基因相关功能的研究[D]. 黄加铭.福建医科大学 2014
[2]不同清洗剂及其不同作用时间对内镜生物膜清除的实验研究[D]. 任伟.南方医科大学 2011
[3]铜绿假单胞菌对邻苯二甲醛与碘伏抗性及其机制研究[D]. 林丹.福建医科大学 2009
[4]复方邻苯二甲醛杀灭医院感染菌效果及其杀菌机理研究[D]. 李晓娜.福建医科大学 2007



本文编号：3709357