效应蛋白AvrXccE1在野油菜黄单菌与拟南芥互作中的功能分析

发布时间：2024-04-11 23:53

　　野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv campestris, Xcc)是十字花科植物黑腐病(black rot disease)的病原菌。Xcc通过Ⅲ型分泌系统将大量的效应蛋白分泌到宿主细胞内,从而抑制宿主的先天免疫。AvrXccE1是Xcc的一个效应蛋白,并且它的同源蛋白广泛存在于黄单胞菌中。 本研究利用三亲结合法敲除avrXccE1基因,获得突变体Xcc8004△avrXccE1,并用竞争指数分析法测定突变体在拟南芥上的毒性。结果显示效应蛋白AvrXccEl对于Xcc8004在拟南芥上的全毒性是必须的。细菌的鞭毛蛋白能够被植物的模式识别受体FLS2识别,同时诱导FRK1::LUC基因(PAMP-responsive reporter gene)的表达。我们发现在拟南芥原生质体中,AvrXccEl可以抑制病原细菌鞭毛蛋白flg22诱导的FRKl基因表达,但并不抑制flg22诱导的MAP激酶活性。推测效应蛋白AvrXccE1抑制的PTI信号通路是不依赖于MAPKs。 通过共聚焦显微镜观察AvrXccE1与GFP的融合蛋白,结果显示效应蛋白Av...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1 野油菜黄单胞菌概述
    2 黄单胞菌致病因子
    3 黄单胞菌Ⅲ型分泌系统及效应蛋白研究进展
        3.1 Ⅲ型分泌系统
            3.1.1 细菌Ⅲ型分泌系统的结构组成
        3.2 黄单胞效应蛋白的研究进展
    4 植物先天免疫
        4.1 PAMPs激活的抗病反应
        4.2 效应蛋白激活的免疫反应
    5 寄主植物和病原细菌的共进化
    6 本文的研究目的和意义
第二章 实验材料与方法
    1 实验材料
        1.1 质粒与菌株
            1.1.1 质粒
            1.1.2 菌株
        1.2 植物材料
        1.3 药品和试剂
            1.3.1 培养基
            1.3.2 分子克隆相关试剂
            1.3.3 蛋白相关试剂
            1.3.4 Western blot相关试剂配制
            1.3.5 试剂盒
            1.3.6 拟南芥原生质体转化用试剂
        1.4 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 载体构建
        2.2 Xcc8004基因组DNA提取
        2.3 质粒小量提取
        2.4 avrXccE1基因敲除与互补
        2.5 植物培养与接种
        2.6 质粒的大量提取
        2.7 拟南芥原生质体制备、转化和蛋白提取
        2.8 荧光素酶双报告系统分析
        2.9 MAPK激酶活性分析
        2.10 Western杂交
        2.11 共聚焦显微镜观察
第三章 野油菜黄单胞菌效应蛋白AvrXccEl致病机理研究
    1 结果与分析
        1.1 avrXccE1基因的敲除
        1.2 AvrXccE1对于Xcc8004在拟南芥上的全毒性是必须的
        1.3 效应蛋白AvrXccE1在拟南芥原生质体中抑制flg22诱导的基因表达
        1.4 效应蛋白AvrXccE1不抑制flg22诱导的MAPK激酶活性
        1.5 AvrXccE1定位于细胞膜
        1.6 肉蔻乙酰化位点对于AvrXccE1的毒性和无毒功能是必须的
    2 讨论
    3 结论
参考文献
缩略语表
附录1 实验所用载体图
附录2 实验所用引物
附录3 硕士期间发表的文章
致谢



本文编号：3951337