变形链球菌AI-2活性测定及luxS基因同源重组质粒的构建

发布时间：2022-12-08 01:16

　　目的构建用于转化变形链球菌的 luxS 基因缺失的同源重组克隆载体。方法利用哈氏弧菌（Vibrio harveyi）BB170作为报告菌株,对变形链球菌在不同生长时期诱导生物发光的能力进行测定,然后分别 PCR 扩增变链菌 luxS 基因上下游片段及质粒 PJT10的红霉素抗性基因片段,采用分子克隆技术将基因片段依次双酶切后连接入载体 pUC19,构建 luxS 基因缺失的重组质粒,转化到大肠杆菌 DH5α感受态细胞经筛选后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定。结果变链菌国际标准株可诱导哈氏弧菌 BB170的生物发光现象,提示变链菌中存在 AI-2数量感应通路。构建的重组质粒pUCluxKO 经 PstI-BamHI 双酶切,产物电泳在大约1000 bp 和5000 bp 处各见一条特异条带;经BamHI-KpnI 双酶切,产物电泳在大约1500 bp 和4500 bp 处各见一条特异条带;经 KpnI-EcoRI 双酶切后,产物电泳在大约1000 bp 和5000 bp 处各见一条特异条带。结论变链菌 luxS 基因同源重组质粒构建成功,为进一步通过同源重组法构建变链菌 luxS 基因缺陷株... 

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