重组酶介导的扩增技术检测呼吸道合胞病毒方法的建立和初步评价

发布时间：2023-09-13 21:26

　　背景:急性下呼吸道感染(ALRI)是导致全球儿童死亡的主要原因之一,同时也是婴幼儿住院治疗的常见病因之一。其中,呼吸道合胞病毒(RSV)被认为是导致全球婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病原体。健康儿童感染RSV后往往经受轻度感冒样症状,但不太强壮的婴儿,如早产儿或有先天性心脏病的婴儿,则可能面临严重疾患,需要住院治疗,后果可能是致命的。成人感染RSV,通常会引起轻微的上呼吸道症状,但是老人及免疫缺陷者感染RSV也会产生严重的呼吸道疾病,如哮喘、细支气管炎、肺炎等。因此,RSV感染给社会造成了巨大的医疗和经济负担,快速确诊病因对临床早期诊断和指导治疗有重要意义,而病原体的检测则是疾病确诊的前提条件。重组酶介导的扩增(Recombinase aided amplification,RAA)技术是在现有体外核酸扩增原理的基础上发展起来的一种新型的具有我国自主知识产权的等温核酸快速检测技术。RAA技术利用特殊的酶和蛋白在37-42℃的等温条件下,30分钟内即可实现对目的基因片段的指数级扩增,更快速、操作简便、价格低廉,克服了现有分子检测方法的不足。RAA扩增产物的检测方式多样,可以结合便携式的恒...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中英文缩略表
中文摘要
Abstract
前言
    一、研究背景
        1 呼吸道合胞病毒的病原学概述
        2 呼吸道合胞病毒的流行病学特征
        3 呼吸道合胞病毒诊断方法的研究进展
        4 重组酶介导的扩增(Recombinase aided amplification,RAA)技术概述
    二、选题目的和研究内容
    三、技术路线
    四、研究意义
第一部分 实时荧光逆转录重组酶介导的扩增技术检测呼吸道合胞病毒方法的建立与初步评价
    1 实验材料
        1.1 临床标本
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器和耗材
    2 实验方法
        2.1 引物、探针的设计原则
        2.2 引物探针设计与合成
        2.3 核酸提取
        2.4 阳性质粒标准品的制备
        2.5 RAA凝胶反应体系的建立和引物筛选
        2.6 实时荧光RT-RAA反应体系的建立和优化
        2.7 实时荧光RT-RAA检测RSV的灵敏度测试
        2.8 实时荧光RT-RAA检测RSV的特异性测试
        2.9 临床样本检测
    3 实验结果
        3.1 RAA凝胶反应体系的建立和引物筛选
        3.2 反应条件优化
        3.3 实时荧光RT-RAA检测RSV的灵敏度
        3.4 实时荧光RT-RAA检测RSV的特异性
        3.5 临床标本检测与评价
    4 讨论
第二部分 逆转录重组酶介导的扩增技术结合侧流层析试纸条检测呼吸道合胞病毒方法的建立和初步评价
    1 实验材料
        1.1 临床标本
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器和耗材
    2 实验方法
        2.1 引物、探针的设计原则
        2.2 引物探针设计与合成
        2.3 核酸提取
        2.4 RT-RAA-LFD反应体系的建立
        2.5 RT-RAA-LFD方法检测RSV的灵敏度测试
        2.6 RT-RAA-LFD方法检测RSV的特异性测试
        2.7 临床样本检测
    3 实验结果
        3.1 引物和探针设计
        3.2 RT-RAA-LFD法检测RSV的灵敏度
        3.3 RT-RAA-LFD法检测RSV的特异性
        3.4 临床标本检测与评价
    4 讨论
全文总结
创新性
展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读硕士研究生期间发表的文章
个人简历



本文编号：3845942