靶向剪切AAVS1位点CRISPR/Cas9腺病毒系统的构建

发布时间：2024-01-14 13:22

　　本研究拟使用腺病毒介导的CRISPR/Cas9系统靶向剪切AAVS1位点,为实现AAVS1位点基因定点插入奠定基础。设计针对AAVS1位点的gRNA序列,连接到pENTRY-U6-h EF1a-Cas9载体,通过Gateway技术重组到腺病毒骨架质粒pAD,转染293A细胞包装腺病毒。腺病毒感染Hela细胞系,使用T7E1酶切及测序检测AAVS1位点的打靶效率。T7EI酶切结果显示腺病毒介导的CRISPR/Cas9系统剪切效率达到28.5%。腺病毒介导的CRISPR/Cas9系统对AAVS1位点成功实施了剪切,为下一步在Hela细胞内进行基因定点敲入及基因治疗奠定了基础。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 sg RNA序列的设计
    1.2 特异识别AAVS1位点的sg RNA表达载体的构建
    1.3 腺病毒的包装
    1.4 腺病毒敲除效率检测
    1.5 sg RNA识别位点的测序
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 试剂材料
    3.2 细胞株及细胞培养
    3.3 引物合成
    3.4 sg RNA序列的设计
    3.5 特异识别AAVS1位点的sg RNA表达载体的构建
    3.6 腺病毒的包装
    3.7 腺病毒敲除效率检测
作者贡献



本文编号：3878310