基于时间分辨荧光微球的免疫分析技术平台的建立及临床应用

发布时间：2024-02-16 01:29

　　时间分辨荧光微球是一种性能优异的新兴免疫标记物,本研究将时间分辨荧光微球作为标记物应用于免疫层析平台与磁分离时间分辨免疫分析平台上,并对两平台进行全面而准确的试剂性能评价和临床可行性评估。本课题实验内容主要分为三大部分:(1)研制基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测NGAL试纸条;(2)研制基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测Anti-HBc试纸条;(3)研制基于时间分辨荧光微球的AFP/Freeβ-HCG双标记磁分离时间分辨荧光免疫分析试剂。实验设计涵盖了建立和优化反应体系、在最优的反应体系下全面评价自制试剂的各项性能指标作,包括剂量-反应曲线、分析灵敏度、准确度、精密度、特异性、抗干扰性分析以及临床可行性。实验一结果:(1)基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测NGAL试纸条的分析灵敏度为0.30 ng/mL,线性范围达10～6000 ng/mL。回收率在96.80%～108.08%之间,准确度好;分析内和分析间变异系数分别在为5.23%～8.19%和7.02%～9.24%之间;未与高浓度的α1-MG、HGF、α1-AAG和MMP-2发生交叉反应,且不受高浓度血红蛋白、甘油三酯...

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２消除背景劳光干扰的原理示意图（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??Ｆｉｇ．２?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｅｌｉｍｉｎａｔｅ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ?（ｆｒｏｍ?ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）??

衰变时间的差异，在样品被激发光激发后、荧光信号收集之前的这段时间，通??过延迟一定时间，等待测样品中短寿命的背景荧光完全泮灭后，再采集和检测??镧系元素螯合物特异性长寿命荧光信号，原理如图２所示。利用时间延迟技术??将特异性荧光与非特异性荧光分辨开来，极大减少本底干扰，使理论本底....

图３四种不同的镧系元素发射波长（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??

图２消除背景劳光干扰的原理示意图（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??Ｆｉｇ．２?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｅｌｉｍｉｎａｔｅ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ?（ｆｒｏｍ?ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）??根据各镧系离子螯合....

图１－３样品垫预处理缓冲液配方的优化??Ｆｉｇ．?１－３?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?ｏｆ?ｓａｍｐｌｅ?ｐａｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒ??

图１－３样品垫预处理缓冲液配方的优化??Ｆｉｇ．?１－３?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?ｏｆ?ｓａｍｐｌｅ?ｐａｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒ??从图１－３结果显示：当样品垫预处理液不添加Ｓ９时，ＡｂｓＨｃ试纸条的ＡｂｓＨｃ??值较低，而ｂａｓ....

图１－４偶联缓冲液的优化??Ｆｉｇ．１－４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｕｐｌｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??

７＿０）和?２５ｍｍｏｌ／ＬＣＢＳ?（ｐＨ８．０）。取定标品?Ａ?（Ｏｎｇ／ｍＬ）与?Ｆ?（６０００?ｎｇ／ｍＬ）??两定标品作为样本，按照检测流程进行检测（ｎ＝５），记录各自的ＨＴ／ＨＣ并对计??算其比值（即信噪比Ｓ／Ｎ），结果见图１－４。??＝?；?１０００??１〇?—??１....

本文编号：3900583