医学论文论白藜芦醇对小鼠酒精性肝损伤的抑制

　　作用醉酒、酗酒两会引起身体的小适，大量酒精摄人会造成人体多种器官损害，其中对肝脏的损害尤其严重。随着人民生活水平的提高，酒精性肝病(Alcohol Liver Disease)已经成为继病毒性肝炎后的另外一种多发的肝损伤疾病 。但目前为止尚没有一种高效的方法可以减轻酒后『互应及饮洒带来的肝损伤。白藜芦醇(resveratrol，Res)是一种广泛存在于自然界多种植物中的多酚类化合物，具有抗氧化、降低血液粘倒度、预防癌症的发生、抗过敏、抗突变、抗验证、调节免疫等药理活性，被广泛应用于医药、保健品、化妆品和食品添加剂等领域。近年研究表明，Res对过氧化氖、四氯化碳、酒精等所致肝损伤具有抑制作用，且对肝纤维化和肝癌的治疗有重要的潜在意义 。本研究拟通过小鼠酒精性肝损伤模型，研究Res防止洒精性肝损伤的作心机理，为开发利用其类似物提供试验资料和 论依据。

　　1 材料与方法

　　1．1 材料

　　1．1．1 动物。SPF级昆明种雄性小白鼠(北京中国医学科学院实验动物研究所，许可证号：SCKX(京)2004—0001)，6～8周龄，体质量18～22 g。常规颗粒饲料喂养，自由饮水，室温22-25℃，相对湿度40％ ～70％ 。

　　1．1．2 药品与试剂。白藜芦醇(购白巾同药品生物制品检定所，批号：110742—200517，纯度99．9％)；超氧化物歧化酶SOD测定试剂(南京建成生物工程研究所，批号：20100503)，丙二醛MDA测定试剂(南京建成生物工程研究所，批号：20100503)，考马斯亮兰蛋白测定试剂(南京建成生物工程研究所，批号：

　　20100515)，ALT试剂盒(广州标佳科技公司生产，批号：021129)，AST试剂盒(广州标佳科技公司生产，批号：020926)；10％的甲醛由PBS液稀释得到，其它试剂均为分析纯。

　　1．1．3 仪器。X一22R低温离心机(德同BECKMAN公司)，MH2000电子水浴恒温槽(北京医疗设备总厂)，酶标仪(BIO—RAD)，玻璃研磨器(田产)；CO 培养箱(型号2123TC)；旋转蒸发仪(上海 荣生化仪器厂)；电子天平(上海菁海仪器有限公司，型号A2104N)；CX9仝自动生化分析仪(BECKMAN公司生产)；微量移液器eppendorf(Made in USA)。

　　1．2 方法

　　1．2．1 小鼠肝损伤模型制备级分组给药。实验小鼠适应性饲养1周，随机分成5组，每组l2只：①正常组：每火上午、下午分别按照10mL／kg灌胃0．9％生理盐水；②模型组：每人上午按照10mL／kg灌胃0．9％生理盐水，下午灌胃0mL／kg，50％ 的乙醇；③ 低剂量白藜芦醇给药组：每天上午按照10mL／kg灌胃0．02g／kg白藜芦醇．下午灌胃10mL／kg，50％ 的乙醇； ④中剂量白藜芦醇给药组：每天上午按照10mL／kg灌胃0．04g／kg白藜芦醇，下午灌胃10mL／kg，50％ 的乙醇；⑤ 高剂量白藜芦醇给药组：每天上午按照10mL／kg灌胃0．08g／kg白藜芦醇，下午灌胃10mL／kg，50％的乙醇。各组均连续灌胃10天。

　　1．2．2 指标检测。上述各组小鼠灌胃期间每天观察精神活动、毛色、饮食、体质量等一般状态；末次给予乙醇后禁食不禁水12h，称重，采用摘眼球取血，3000 r／min离心，取血清按试剂盒说明书测定血清谷雨转氩酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性；取血后颈椎脱臼处死小鼠，迅速取出肝脏称重(计算肝指数=肝重／体质量X 100％)，左叶用冷生理盐水制备成100g／i 肝匀浆，测定肝匀浆上清液SOD活力及MDA含量，取肝组织匀浆用考马斯亮兰蛋白测定法测定蛋白含量；取肝右叶用10％}f]醛固定，石蜡包埋切片，进行HE染色，观察其病理变化。

　　1．2．3 统计学处理。实验数据用计算机instate件处理，所有数据以均数加减标准差(x±s)表示，采用× 分析方法，P<0．05表明有 著性差异。

　　2 结果

　　2．1 小鼠一股状态除正常对照组外，各组小鼠自灌胃乙醇第3天出现易激惹、反抗性增强或减弱、聚堆，部分小鼠出现腹部胀大，进食及饮水量减少，毛色无润泽，稍竖立，随着灌胃时间的延长上述现象加重。与模型组比较，不同剂量白藜芦醇给药组小鼠一般状态有改善，高剂量组更明显。

　　2．2 白藜芦醇对小鼠体重、肝指数的影响见表1。由表1可以看出灌胃乙醇可使小鼠体质量和肝指数降低，与模型组比较，白藜芦醇各给药组体质量和肝指数有所增加，且有剂量依赖性。

　　2．3 白藜芦醇对小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响见表2。表2结果显示，模型组小鼠血清A 和AST明 高于正常组，高自藜芦醇各剂量组血清ALT活力和AST活力显著低于模型组(P <0．05，P<0．01)，高剂量组作用更明显。

　　2．4 白藜芦醇对小鼠肝组织MDA、SOD的影响见表3。由表3可见，模型组高肝组织SOD的活性明显降低，而MDA含量明显升高；与模型组比较，白藜芦醇可以显著提高肝组织SOD的活性和降低MDA的含量，呈明显剂量效应关系。

　　2．5 白藜芦醇对小鼠肝组织外观及病理改变的影响 正常对照组肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性；模型组则肝脏表砸呈黄褐色，笔耕论文，有些呈灰白色，弹性差；白藜芦醇符给药组多数外观介于对照组与模型绀之间。HE染色光镜下见：正常组肝小叶结构清晰，肝细胞索排列规则，以中央静脉为中心，呈放射状排列，肝细胞未见异常改变；模型组小鼠肝细胞索排列紊乱，细胞可见大小不等、分布不均的脂滴，有空泡样病变，部分肝细胞溶解坏死或细胞核溶解，大量炎细胞浸润；白藜芦醇各给药组肝组织病理改变有所减轻，部分肝细胞出现水肿与脂肪变性，可见点状坏死，高剂量组有少数肝细胞水肿，轻度脂肪变性及坏死。

　　3 讨论肝脏足酒精的代谢器官，肝细胞对酒精及其衍生物乙醛的影响极为敏感，过量饮酒可造成肝脏不同程度的损伤。据统计，重度饮酒精者巾90％～100％ 有一定程度的脂肪肝，lO％～35％ 可发展成酒精性肝炎，8 ～20％将发展为肝硬化。

　　酒精在肝细胞内会产生过多的氧应激产物，如OH一、O，H0等自由基。这些自由基可激活磷脂酶及脂质过氧化反应，降低膜磷脂，改变其通透性和流动性，从而改变与膜结合的酶、受体和离子通道的微环境，影响其功能。因此，血清转氨酶活性升高是肝细胞受损的敏感性指标 。实验结果显示，模型绀小鼠血清ALT~AST活性与正常对照组相比明最升高，白藜芦醇可呈剂量依赖性明显降低血清ALT、AST活性，说明白藜芦醇对乙醇诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。