GhACBP4在棉花花药发育中的功能鉴定

发布时间：2022-12-08 01:07

　　近年来,全球变暖引发的区域性高温是导致农作物雄性不育的重要因素之一,并且严重威胁农业生产。研究表明GhCKI在响应高温导致棉花雄性不育方面具有重要功能,因此为了进一步解析高温胁迫导致棉花雄性不育的败育机理,通过酵母双杂筛选出与GhCKI互作的GhACBP4（acyl-CoA-binding protein 4）蛋白,并且从超表达GhCKI拟南芥花蕾和棉花H05（高温敏感型）花药的磷酸化蛋白质组中筛选出3种ACBP4的磷酸化肽段。因此,本研究主要解析GhACBP4在花药中的功能,主要结果如下:1、经过序列分析发现,在陆地棉基因组中GhACBP4存在6个同源基因。组织表达模式分析表明Gh_A13G0893/Gh_D13G1134在花药中优势表达。然而转基因材料proGh_A13G0893::GUS的组织表达模式表明,该基因在花药、胚珠和萌发后的种子中高量表达。而且,高温诱导表达模式分析表明,在花药开裂期（ADS,＞24mm花蕾）GhACBP4同源基因总体的表达量受高温诱导后可能会下调表达。2、综合比较6个同源基因的表达水平和3种磷... 

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 文献综述
    前言
    1.1 植物雄性生殖器官的发育
        1.1.1 花药发育的细胞学过程
        1.1.2 花药发育的分子机制
        1.1.3 花粉壁发育的过程
    1.2 高温胁迫对雄性生殖器官的影响
        1.2.1 高温胁迫下雄性生殖器官的表现
        1.2.2 高温胁迫导致雄性败育的机理研究
    1.3 植物ACBP研究概述
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 载体和菌株
    2.2 试验方法
        2.2.1 提取棉花RNA操作
        2.2.2 RNA反转操作
        2.2.3 RT-PCR和qRT-PCR
        2.2.4 TTC花粉活性染色液
        2.2.5 透射电镜
        2.2.6 原核蛋白表达实验
        2.2.7 双向电泳
        2.2.8 GUS染色分析
        2.2.9 花药石蜡切片的制作
        2.2.10 原位杂交
        2.2.11 酵母双杂
        2.2.12 双分子荧光互补和亚细胞定位
        2.2.13 双分子荧光素酶互补实验
        2.2.14 游离脂肪酸含量测定
        2.2.15 花药脂质提取和薄层层析
        2.2.16 淀粉含量测定操作
        2.2.17 磷酸化反应和去磷酸化反应
        2.2.18 数据处理
3 结果与分析
    3.1 GhACBP4序列分析
    3.2 GhACBP4的组织表达分析
    3.3 GhACBP4的高温诱导表达分析
    3.4 GhACBP4转基因棉花表型鉴定和分子检测
    3.5 脂肪酸和脂质含量检测
    3.6 GhACBP4与GhCKI的蛋白互作研究
    3.7 原核表达GhACBP4蛋白
4 讨论
    4.1 GhACBP4蛋白可能参与过氧化物酶体脂质代谢
    4.2 RNA干涉GhACBP4导致棉花花药败育的机理
    4.3 超表达GhACBP4导致棉花花药败育的机理
    4.4 高温胁迫下GhACBP4导致棉花花药败育的机理
5 后续展望
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]DEX1, a plasma membrane-localized protein, functions in microspore development by affecting CalS5 expression in Arabidopsis thaliana[J]. MA LiJuan,YANG ZhongNan,ZHANG Sen.  Chinese Science Bulletin. 2013(23)
[2]小气候与棉花败育的关系[J]. 金桂红.  南京农业大学学报. 1985(01)

博士论文
[1]高温胁迫下棉花花药发育表达谱分析及GhCKI基因功能鉴定[D]. 闵玲.华中农业大学 2013



本文编号：3713235