中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征及其与微生物菌群多样性关系研究

发布时间：2020-04-04 19:42

【摘要】：中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征,俗称“水瘪子”病,该病从春季到秋季均有发生,发病高峰期是夏季高温天气,幼蟹到成蟹均可发生感染,且死亡率较高,已成为制约中华绒螯蟹养殖业健康发展的重要因素。本研究通过对江苏省中华绒螯蟹主养区的中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征流行病学调查、病原检测、组织病理学研究及病蟹组织和环境菌群多样性分析,旨在揭示中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征流行情况、潜在病原种类、病变特征及肝胰腺病变前后细菌菌群多样性,为中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征防控提供一定的参考。主要研究内容如下:(1)中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征流行病学调查研究。对江苏省中华绒螯蟹主养区进行定点追踪采样,详细记录疾病发生情况,分析2018年中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征在养殖生产中的发生特点与流行规律。结果表明:2018年中华绒螯蟹肝胰腺病综合征发生较少,只在夏季高温季节部分送样点有散发性发生。(2)中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征潜在病原检测研究。对中华绒螯蟹的鳃、肝胰腺和肠道进行白斑综合征病毒、肝肠孢子虫、微孢子虫和螺原体检测,对病蟹肝胰腺组织进行细菌分离和致病性试验。结果表明:健康中华绒螯蟹和病蟹均可检测出白斑综合征病毒,健康中华绒螯蟹可检测出肝肠孢子虫,微孢子虫、螺原体检测均为阴性;白斑综合征病毒、微孢子虫、肝肠孢子虫、螺原体这四类潜在病原与中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征的发生可能无关;自发病中华绒螯蟹分离鉴定的嗜水气单胞菌和弗氏柠檬酸杆菌对中华绒螯蟹均具有致病性,LD50 分别为 5.4×105 CFU/mL 和 3.2×106 CFU/mL。(3)中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征组织病理学研究。通过常规石蜡切片、HE染色,对患肝胰腺病变综合征的中华绒螯蟹各个组织制备病理切片,同时以健康中华绒螯蟹的相应组织作对照,显微镜观察分析其发病整个过程中各组织的变化情况。结果表明:肝胰腺、鳃和肌肉等组织均发生不同程度的破坏和病变,其中肝胰腺组织损伤最大。发病中华绒螯蟹肝小管间的血细胞数量增多,基膜破裂,部分肝小管发生水肿、变性,细胞结构模糊,空泡变大;发病中华绒螯蟹鳃叶增厚,上皮细胞排列不规则,数量众多的血细胞充挤于血腔,角质膜呈波状拱起,部分角质膜与上皮细胞层分离形成大的空泡,鳃叶间有少量的杂质污物;发病中华绒螯蟹肌纤维松散,部分肌纤维断裂,横纹模糊。(4)病蟹与健康蟹及水样、泥样微生物菌群多样性分析。取中华绒螯蟹鳃、肝胰腺、肠道组织、养殖用水及底泥,进行宏基因组高通量测序分析,分析发病中华绒螯蟹养殖区各组织、水体及底泥的微生物菌群状况,并与健康中华绒螯蟹及环境微生物群落进行比较。结果表明:不同分类水平上,各组织菌群组成存在较大的差异。健康中华绒螯蟹各组织中优势菌群趋势为:厚壁菌门、无壁菌门、变形菌门、拟杆菌门;肝胰腺病变综合征各组织优势菌群趋势为:变形菌门、厚壁菌门、无壁菌门。健康中华绒螯蟹水体及底泥的优势菌群为:变形菌门,拟杆菌门、放线菌门、厚壁菌门、疣微菌门;发病中华绒螯蟹水体及底泥的优势菌群种类与健康中华绒螯蟹水体及底泥的优势菌群基本一致。发病中华绒螯蟹鳃组织与健康中华绒螯蟹相比,变形菌门、放线菌门含量减少,拟杆菌门含量增加;发病中华绒螯蟹肝胰腺组织中变形菌门含量减少,厚壁菌门、拟杆菌门含量增加,增加了绿弯菌门和疣微菌门;发病中华绒螯蟹肠道组织中拟杆菌门、变形菌门含量增加,无壁菌门含量下降。研究结果为进一步揭示中华绒螯蟹肝胰腺病变综合征发生的原因提供理论参考。
【图文】：

电泳图,微孢子虫,白斑综合症病毒,样品

逡逑部分样品电泳图如图３－１逡逑Ｍ邋２７２８２９３０３１３２３３３４＾５３６３７邋３８３９４０逡逑１邋＾邋＇逡逑图３－１白斑综合症病毒ＷＳＳＶＰＣＲ扩增结果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ逡逑注：２９，３０，邋３１，邋３２，３４，邋３７，邋３８，邋３９，４０为白斑综合症病毒阳性样品条带；逡逑２７，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６为白斑综合症病毒阴性样品条带。逡逑Ｎｏｔｅ：邋２９，邋３０，邋３１，邋３２，邋３４，邋３７，３８，邋３９，邋４０邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｍｓ；逡逑２７，邋２８，邋３３，邋３５，邋３６邋ａｒｅ邋ｓｔｒｉｐｓ邋ｏｆ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋ｗｈｉｔｅ邋ｓｐｏｔ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｖｉｒｕｓ．逡逑３．邋２．邋２微孢子虫检测逡逑检测微孢子虫的中华绒螯蟹样品５７个（除去兴化和武进现场采样的１１个样品），部分逡逑电泳图见图３－２。由实验结果可知，中华绒螯蟹样品微孢子虫检测均为阴性。逡逑Ｍ邋１邋２邋３邋４邋＋逡逑ｂｐ逡逑２０００１逡逑ｌｏｏｏＨＩ逦＇逡逑７５０逡逑５００邋■逡逑２５０邋■逦，逡逑１００邋Ｉ逡逑图３－２微孢子虫ＰＣＲ扩增结果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ逡逑注：１

电泳图,白斑综合症病毒,微孢子虫,样品

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【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S945

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