大菱鲆Toll样受体22（TLR22）全长基因的克隆及表达分析

发布时间：2024-01-04 18:07

　　大菱鲆（Scophthalmus maximus）作为重要的海水养殖鱼类品种之一，它的养殖范围遍布世界各地，也包括我国北方沿海地区。然而，大菱鲆在海水养殖过程中极易受到包括大菱鲆虹彩病毒（TRBIV）在内的多种致病微生物的感染，特别是随着养殖规模的迅速扩大，其病害问题显得日益严重，使大菱鲆养殖业蒙受了巨大经济损失。作为最具代表性的模式识别受体，Toll样受体（Toll-like rceptor，TLRs）不但能够通过识别病原，激活下游信号转导途径，在非特异性免疫（先天性免疫）中发挥重要的作用，而且还能激活特异性免疫（获得性免疫），是联系先天性免疫和获得性免疫的桥梁。研究证明，髓样分化因子88（MyD88）和β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TIR domain-containing adaptor inducinginterferon-β, TRIF）是TLRs介导的信号通路中两类重要的接头分子，他们能够分别介导MyD88依赖型信号通路和TRIF依赖型信号通路，使转录因子活化，并最终促使促炎因子释放和I型干扰素等的释放，从而调动获得性免疫应答。对大菱鲆鱼Toll样受体进行相关研究将有助于更...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 先天性免疫系统
    1.2 TLR 的发现、结构及分布
        1.2.1 TLR 的发现
        1.2.2 TLR 的结构
        1.2.3 TLR 的分布
        1.2.4 TLRs 家族成员分类及配体
        1.2.5 TLR 信号通路
    1.3 鱼类 TLRS 研究概述
        1.3.1 鱼类 TLRs 的种类
        1.3.2 TLR22 的研究进展
    1.4 本研究的目的及意义
第二章 大菱鲆 TLR22 基因的克隆及序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 鱼、载体、菌株
        2.1.2 主要实验仪器
        2.1.3 试剂及相关溶液
    2.2 实验方法
        2.2.1 组织获取
        2.2.2 总 RNA 提取
        2.2.3 cDNA 第一链的制备
        2.2.4 大菱鲆 TLR22 全长 cDNA 的克隆
        2.2.5 大菱鲆 TLR22 基因组 DNA 的克隆
        2.2.6 分析与构建进化树
    2.3 实验结果分析
        2.3.1 RNA 质量检测
        2.3.2 cDNA 序列的克隆及测序结果
        2.3.3 TLR22 基因组 DNA 序列的克隆及测序结果
        2.3.4 大菱鲆 TLR22 系统进化分析
    2.4 讨论
第三章 大菱鲆 TLR22 的组织分布研究
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 大菱鲆
        3.1.2 仪器与设备
        3.1.3 试剂及溶液
    3.2 实验方法
        3.2.1 组织的获取
        3.2.2 总 RNA 的提取及其质量检测
        3.2.3 cDNA 第一链的制备
        3.2.4 引物的设计
        3.2.5 qPCR 检测
        3.2.6 数据分析
    3.3 结果分析
    3.4 讨论
第四章 大菱鲆 TLR22 基因的表达分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 刺激物
        4.1.2 仪器与设备
        4.1.3 试剂及相关溶液
        4.1.4 主要溶液及溶液的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 poly I:C、TRBIV 和 LPS 感染大菱鲆鱼体
        4.2.2 模板的制备
        4.2.3 cDNA 第一链的制备
        4.2.4 qPCR 检测
        4.2.5 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 Poly I:C 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表达
        4.3.2 TRBIV 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表达
        4.3.3 LPS 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表达
    4.4 讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历
学术论文



本文编号：3876817