克氏原螯虾源维氏气单胞菌的鉴定、致病性研究及抗菌中草药筛选

发布时间：2024-01-16 18:05

　　随着克氏原螯虾养殖业的迅猛发展,其病害越来越严重,病害已经成为制约克氏原螯虾产业健康发展的重要因素。2016年5月,湖北省潜江市某克氏原螯虾养殖场出现克氏原螯虾暴发性死亡现象,造成了严重的经济损失。患病虾四肢无力,反应迟钝,应激能力较弱,伏于池塘边沿或水草上陆续死亡。为厘清病因,本研究对患病虾进行了病原菌的分离和鉴定,通过毒力因子检测和多位点序列分型研究该菌毒力基因的分布并确定其分型地位。对人工感染后不同时期的虾组织进行病理学观察,探讨该菌对克氏原螯虾的致病机理。此外,本研究还开展了30种中草药抑菌、杀菌试验,以期为克氏原螯虾细菌性疾病的防控提供科学依据。具体研究结果如下:1.从患病克氏原螯虾肝胰腺中分离到一株优势菌,命名为QD160502。表型鉴定发现QD160502为短杆状革兰氏阴性菌,生理生化特性与维氏气单胞菌参考菌株基本一致。分子生物学鉴定结果表明菌株QD160502的16S r DNA(登录号为:KX585901)和gyr B序列(Gen Bank登录号:MN189983)与Gen Bank上维氏气单胞菌的同源性最高,系统发育分析显示QD160502与维氏气单胞菌聚为一支。回...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 克氏原螯虾养殖常见疾病
        1.1 病毒性疾病
        1.2 真菌性疾病
        1.3 细菌性疾病
    2 维氏气单胞菌的研究进展
        2.1 分类及地位
        2.2 维氏气单胞菌的生物学特征
        2.3 维氏气单胞菌的鉴定方法
        2.4 维氏气单胞菌的致病性
        2.5 维氏气单胞菌的毒力因子
        2.6 维氏气单胞菌的基因分型研究
    3 中草药抗菌研究进展
        3.1 中草药抗菌药物筛选
        3.2 中草药抗菌机理研究
        3.3 中草药制剂在虾蟹养殖中应用
    4 本研究内容及目的意义
第二章 克氏原螯虾源维氏气单胞菌的分离鉴定和分型研究
    1 材料和方法
        1.1 样品的收集和处理
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 病原的分离和纯化
        1.5 回归感染实验
        1.6 表型鉴定
        1.7 16Sr DNA和 gyrb基因的PCR鉴定及其系统发育分析
        1.8 药物敏感性实验
        1.9 毒力基因的检测
        1.10 菌株MLST分型
    2 结果与分析
        2.1 患病虾症状和分离菌观察
        2.2 生理生化特征
        2.3 致病性试验
        2.4 16S r DNA和 gyr B鉴定及其系统发育分析
        2.5 病原菌的药敏性
        2.6 MLST分型
        2.7 毒力基因检测结果
    3 讨论
第三章 维氏气单胞菌感染克氏原螯虾的组织病理学研究
    1 材料和方法
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 样品的收集和处理
        1.4 组织病理切片制作
    2 结果与分析
    3 讨论
第四章 中草药对维氏气单胞菌体外抑菌实验
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 中草药浓缩药液的制备
        1.4 维氏气单胞菌菌悬液的制备
        1.5 药物敏感性试验
        1.6 中草药最小抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定
    2 结果与分析
        2.1 药液抑菌圈直径的测定结果
        2.2 中草药药液体外MIC与 MBC测定结果
    3 讨论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3878920