中华绒螯蟹血细胞吞噬功能与凋亡分子机制的研究
发布时间：2024-01-18 17:20
中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是我国重要的名优水产养殖品种。近来年随着养殖规模的不断扩大和养殖环境的日趋恶化,由细菌、病毒、寄生虫、类立克次体等病原生物等引起的病害日趋严重,给中华绒鳌蟹养殖业造成了巨大的损失,严重威胁、制约着我国蟹类养殖的健康发展。甲壳动物没有类似高等动物的特异性免疫系统,主要是依靠血细胞的天然免疫系统来防御病原微生物。对中华绒螯蟹先天免疫及相关机制研究已成为其抗病研究的热点,通过研究其免疫机制,可为进一步研发免疫相关制剂,调控免疫能力,以达到减少或清除病害、实现健康养殖的目的提供依据。本研究中,我们在确定了中华绒螯蟹血细胞类型的基础上,研究了各类细胞的体内吞噬功能、LPS诱导血细胞凋亡的机制、细胞粘附因子EsPX和丝裂原蛋白活化激酶EsMAPK等免疫相关蛋白在吞噬和凋亡中的免疫应答反应等。具体研究结果如下：1、中华绒螯蟹血细胞类型及吞噬功能结合相差显微镜、透射电子显微镜及细胞染色技术,本研究将中华绒螯蟹血细胞分为透明细胞、半颗粒细胞和颗粒细胞三大类群。透明细胞为圆形、卵圆形或不规则形状,细胞质中含有极少数颗粒；半颗粒细胞为纺锤形或卵圆形,含有大量...
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
主要英文缩写及译名
第一章 绪论
1.1 甲壳动物血细胞的分类方法
1.1.1 显微镜分类法
1.1.2 细胞染色分类法
1.1.3 透射电子显微镜分类法
1.1.4 流式细胞术分类法
1.2 甲壳动物血细胞的分离
1.3 甲壳动物血细胞的免疫功能
1.3.1 细胞吞噬作用
1.3.2 细胞粘附因子
1.3.3 细胞酚氧化酶原系统
1.3.4 细胞凝集素
1.3.5 结节形成、包囊作用和细胞毒理作用
1.4 甲壳动物血细胞凋亡的调控因子
1.4.1 IAPs和IAP结合蛋白
1.4.2 凋亡蛋白酶Caspases
1.4.3 Bcl-2家族蛋白
1.4.4 Apaf-1和Apip家族蛋白
1.4.5 丝裂原活化蛋白激酶MAPK蛋白
1.5 研究目的及意义
1.6 技术路线
第二章 中华绒螯蟹血细胞分类及吞噬作用研究
2.1 材料与仪器
2.1.1 实验仪器
2.1.2 试剂及试剂盒
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 血细胞收集
2.2.3 血细胞形态观察与分类
2.2.4 血细胞数量统计
2.2.5 流式细胞术检测分类
2.2.6 血细胞超微结构观察
2.2.7 血细胞体内吞噬作用观察
2.2.8 数据统计分析
2.3 实验结果
2.3.1 中华绒螯蟹血细胞的分类
2.3.2 血细胞的体内吞噬作用
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡机制的研究
3.1 材料与仪器
3.1.1 实验仪器
3.1.2 试剂及试剂盒
3.2 实验方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 血细胞收集
3.2.3 LPS、嗜水气单胞菌及枯草芽孢杆菌对血细胞数量的影响
3.2.4 LPS体外诱导血细胞凋亡的检测
3.2.5 LPS诱导血细胞ROS检测
3.2.6 数据统计分析
3.3 实验结果
3.3.1 嗜水气单胞菌和枯草芽孢杆菌对中华绒螯蟹血细胞数量的影响
3.3.2 不同浓度LPS对中华绒螯蟹血细胞数量的影响
3.3.3 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡的形态学观察
3.3.4 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡的DNA片段化分析
3.3.5 流式细胞术检测LPS诱导后中华绒螯蟹血细胞的凋亡
3.3.6 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞的ROS检测
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 中华绒螯蟹细胞粘附蛋白EsPX的克隆及其对外源刺激物的免疫反应
4.1 材料与仪器
4.1.1 实验仪器
4.1.2 试剂及试剂盒
4.2 实验方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 血细胞收集
4.2.3 中华绒螯蟹EsPX序列分析
4.2.4 EsPX mRNA组织表达分析
4.2.5 外源刺激物对EsPX mRNA表达量的影响
4.2.6 EsPX蛋白的亚细胞定位
4.2.7 外源刺激物对EsPX蛋白表达的影响
4.2.8 数据统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 EsPX序列及同源性分析结果
4.3.2 EsPX多序列比对和系统发育树的构建结果
4.3.3 EsPX在不同组织中的分布情况
4.3.4 外源刺激物对EsPX基因表达的影响
4.3.5 EsPX蛋白在不同血细胞的定位
4.3.6 外源刺激物对血细胞EsPX蛋白表达的影响
4.4 讨论
4.5 本章小结
第五章 中华绒螯蟹MAPK基因的克隆及功能分析
5.1 材料与仪器
5.1.1 实验仪器
5.1.2 主要软件
5.1.3 试剂及试剂盒
5.2 实验方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 血细胞收集
5.2.3 中华绒螯蟹EsMAPK序列分析
5.2.4 EsMAPK mRNA组织表达分析
5.2.5 外源刺激物对EsMAPK mRNA表达量的影响
5.2.6 EsMAPK蛋白的原核表达
5.2.7 中华绒螯蟹EsMAPK蛋白的亚细胞定位
5.2.8 外源刺激物对EsMAPK蛋白表达的影响
5.2.9 数据统计分析
5.3 实验结果
5.3.1 EsMAPK序列分析
5.3.2 EsMAPK氨基酸序列同源性分析和系统发育树的构建
5.3.3 EsMAPK在不同组织中的表达
5.3.4 外源刺激物对EsMAPK基因表达的影响
5.3.5 EsMAPK蛋白原核表达
5.3.6 LPS和嗜水气单胞菌对EsMAPK蛋白表达的影响
5.4 讨论
5.5 本章小结
第六章 研究结果与展望
6.1 研究结果
6.2 主要创新点
6.3 不足和展望
参考文献
作者简历及攻读博士期间发表的论文
本文编号：3879700
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
主要英文缩写及译名
第一章 绪论
1.1 甲壳动物血细胞的分类方法
1.1.1 显微镜分类法
1.1.2 细胞染色分类法
1.1.3 透射电子显微镜分类法
1.1.4 流式细胞术分类法
1.2 甲壳动物血细胞的分离
1.3 甲壳动物血细胞的免疫功能
1.3.1 细胞吞噬作用
1.3.2 细胞粘附因子
1.3.3 细胞酚氧化酶原系统
1.3.4 细胞凝集素
1.3.5 结节形成、包囊作用和细胞毒理作用
1.4 甲壳动物血细胞凋亡的调控因子
1.4.1 IAPs和IAP结合蛋白
1.4.2 凋亡蛋白酶Caspases
1.4.3 Bcl-2家族蛋白
1.4.4 Apaf-1和Apip家族蛋白
1.4.5 丝裂原活化蛋白激酶MAPK蛋白
1.5 研究目的及意义
1.6 技术路线
第二章 中华绒螯蟹血细胞分类及吞噬作用研究
2.1 材料与仪器
2.1.1 实验仪器
2.1.2 试剂及试剂盒
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 血细胞收集
2.2.3 血细胞形态观察与分类
2.2.4 血细胞数量统计
2.2.5 流式细胞术检测分类
2.2.6 血细胞超微结构观察
2.2.7 血细胞体内吞噬作用观察
2.2.8 数据统计分析
2.3 实验结果
2.3.1 中华绒螯蟹血细胞的分类
2.3.2 血细胞的体内吞噬作用
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡机制的研究
3.1 材料与仪器
3.1.1 实验仪器
3.1.2 试剂及试剂盒
3.2 实验方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 血细胞收集
3.2.3 LPS、嗜水气单胞菌及枯草芽孢杆菌对血细胞数量的影响
3.2.4 LPS体外诱导血细胞凋亡的检测
3.2.5 LPS诱导血细胞ROS检测
3.2.6 数据统计分析
3.3 实验结果
3.3.1 嗜水气单胞菌和枯草芽孢杆菌对中华绒螯蟹血细胞数量的影响
3.3.2 不同浓度LPS对中华绒螯蟹血细胞数量的影响
3.3.3 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡的形态学观察
3.3.4 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞凋亡的DNA片段化分析
3.3.5 流式细胞术检测LPS诱导后中华绒螯蟹血细胞的凋亡
3.3.6 LPS诱导中华绒螯蟹血细胞的ROS检测
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 中华绒螯蟹细胞粘附蛋白EsPX的克隆及其对外源刺激物的免疫反应
4.1 材料与仪器
4.1.1 实验仪器
4.1.2 试剂及试剂盒
4.2 实验方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 血细胞收集
4.2.3 中华绒螯蟹EsPX序列分析
4.2.4 EsPX mRNA组织表达分析
4.2.5 外源刺激物对EsPX mRNA表达量的影响
4.2.6 EsPX蛋白的亚细胞定位
4.2.7 外源刺激物对EsPX蛋白表达的影响
4.2.8 数据统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 EsPX序列及同源性分析结果
4.3.2 EsPX多序列比对和系统发育树的构建结果
4.3.3 EsPX在不同组织中的分布情况
4.3.4 外源刺激物对EsPX基因表达的影响
4.3.5 EsPX蛋白在不同血细胞的定位
4.3.6 外源刺激物对血细胞EsPX蛋白表达的影响
4.4 讨论
4.5 本章小结
第五章 中华绒螯蟹MAPK基因的克隆及功能分析
5.1 材料与仪器
5.1.1 实验仪器
5.1.2 主要软件
5.1.3 试剂及试剂盒
5.2 实验方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 血细胞收集
5.2.3 中华绒螯蟹EsMAPK序列分析
5.2.4 EsMAPK mRNA组织表达分析
5.2.5 外源刺激物对EsMAPK mRNA表达量的影响
5.2.6 EsMAPK蛋白的原核表达
5.2.7 中华绒螯蟹EsMAPK蛋白的亚细胞定位
5.2.8 外源刺激物对EsMAPK蛋白表达的影响
5.2.9 数据统计分析
5.3 实验结果
5.3.1 EsMAPK序列分析
5.3.2 EsMAPK氨基酸序列同源性分析和系统发育树的构建
5.3.3 EsMAPK在不同组织中的表达
5.3.4 外源刺激物对EsMAPK基因表达的影响
5.3.5 EsMAPK蛋白原核表达
5.3.6 LPS和嗜水气单胞菌对EsMAPK蛋白表达的影响
5.4 讨论
5.5 本章小结
第六章 研究结果与展望
6.1 研究结果
6.2 主要创新点
6.3 不足和展望
参考文献
作者简历及攻读博士期间发表的论文
本文编号：3879700
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3879700.html