草鱼脂肪细胞及肝细胞充脂过程中凋亡特性的比较研究
发布时间：2024-01-30 20:16
脂肪细胞是机体存储多余能量的基本单位,能够大量蓄积甘油三酯以备能量的动员与消耗,而肝细胞则是机体物质代谢的重要部位,对脂质的存储及氧化能力有限。细胞凋亡是由一系列凋亡蛋白酶参与,由凋亡相关基因控制的一个主动的、有序的死亡过程。虽然脂肪细胞和肝细胞均能存储一定量的脂质,但二者在脂质蓄积过程中的凋亡特性及其分子机理有何异同尚不明确。本研究采用基因克隆、原代脂肪细胞和肝细胞系培养等手段,通过检测细胞活力、脂质含量、细胞凋亡率,分化和凋亡相关基因、蛋白的表达及凋亡蛋白酶活性变化,综合比较正常分化的草鱼脂肪细胞与充脂肝细胞的凋亡特性及其分子机理。获得的主要研究结果如下:(1)克隆获得草鱼caspase家族十个成员,包括caspase-a(KX231773),caspase-b(KX231774),caspase-2,caspase-3a(KP145001),caspase-3b(KP145002),caspase-6(KX231775),caspase-7(KX231776),caspase-8(KP145003),caspase-9(KP164812)和caspase-xa。通过结构域分析发现...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 细胞凋亡概述
1.2 细胞凋亡机制
1.3 CASPASE家族研究进展
1.3.1 Caspase家族的命名与种类
1.3.2 Caspase家族的结构与功能
1.4 脂肪组织与脂肪细胞
1.4.1 脂肪细胞的发育过程
1.4.2 鱼类脂肪组织与脂肪细胞
1.4.3 脂肪细胞的凋亡与抗凋亡
1.5 肝脏脂质代谢研究进展
1.5.1 肝细胞与脂质沉积
1.5.2 肝细胞凋亡研究进展
1.6 研究目的与意义
第二章 草鱼凋亡相关基因的克隆及生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验草鱼
2.1.2 主要试剂和仪器
2.1.3 总RNA提取及反转录
2.1.4 引物的设计与合成
2.1.5 PCR扩增ORF框
2.1.6 PCR电泳产物回收与DNA纯化
2.1.7 目的片段与载体连接
2.1.8 目的基因的转化
2.1.9 目的基因的鉴定
2.1.10 生物信息学分析
2.2 结果
2.2.1 草鱼脂肪组织总RNA浓度和质量检测
2.2.2 草鱼caspase家族基因的克隆与鉴定
2.2.3 草鱼caspase家族基因及其编码氨基酸的序列结构分析
2.2.4 草鱼caspase家族蛋白结构域分析
2.2.5 草鱼caspase家族成员基因结构分析
2.2.6 草鱼caspase家族成员基因序列的同源性比较
2.2.7 草鱼caspase家族成员基因序列的进化树分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 脂肪细胞分化过程中凋亡特性的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 试验草鱼
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 草鱼前体脂肪细胞获得及培养
3.1.4 细胞分化检测
3.1.5 流式细胞术检测脂肪细胞分化过程中凋亡率变化
3.1.6 Real-time PCR检测相关基因的m RNA的表达
3.1.7 Western Blot检测分化过程中相关蛋白变化
3.1.8 分化过程中凋亡相关蛋白酶活性的变化
3.1.9 数据分析
3.2 结果
3.2.1 草鱼脂肪细胞分化过程中形态学变化
3.2.2 脂肪细胞分化过程中凋亡率的变化
3.2.3 脂肪细胞分化过程中分化标志基因的表达
3.2.4 脂肪细胞分化过程中凋亡相关基因的表达
3.2.5 脂肪细胞分化过程中分化和凋亡相关蛋白的表达
3.2.6 脂肪细胞分化过程中凋亡蛋白酶的活性变化
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 草鱼肝细胞充脂过程中凋亡特性的研究
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试剂
4.1.2 草鱼肝细胞的培养
4.1.3 MTT检测不同浓度油酸对肝细胞活力影响
4.1.4 油红O染色提取法测定脂质含量
4.1.5 BODIPY染色法和DAPI染色法观察肝细胞内脂滴和细胞核变化
4.1.6 流式细胞术检测不同浓度油酸对肝细胞凋亡的影响
4.1.7 Real-time PCR检测相关基因的m RNA的表达
4.1.8 统计分析
4.2 结果与分析
4.2.1 油酸处理对草鱼肝细胞活力的影响
4.2.2 油酸处理对草鱼肝细胞脂质蓄积的影响
4.2.3 油酸处理对草鱼肝细胞凋亡率的影响
4.2.4 油酸处理对草鱼肝细胞脂质生成基因和凋亡相关基因表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 综合讨论与结论
5.1 综合讨论
5.2 结论
5.3 创新点
5.4 下一步研究内容
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3890324
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 细胞凋亡概述
1.2 细胞凋亡机制
1.3 CASPASE家族研究进展
1.3.1 Caspase家族的命名与种类
1.3.2 Caspase家族的结构与功能
1.4 脂肪组织与脂肪细胞
1.4.1 脂肪细胞的发育过程
1.4.2 鱼类脂肪组织与脂肪细胞
1.4.3 脂肪细胞的凋亡与抗凋亡
1.5 肝脏脂质代谢研究进展
1.5.1 肝细胞与脂质沉积
1.5.2 肝细胞凋亡研究进展
1.6 研究目的与意义
第二章 草鱼凋亡相关基因的克隆及生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验草鱼
2.1.2 主要试剂和仪器
2.1.3 总RNA提取及反转录
2.1.4 引物的设计与合成
2.1.5 PCR扩增ORF框
2.1.6 PCR电泳产物回收与DNA纯化
2.1.7 目的片段与载体连接
2.1.8 目的基因的转化
2.1.9 目的基因的鉴定
2.1.10 生物信息学分析
2.2 结果
2.2.1 草鱼脂肪组织总RNA浓度和质量检测
2.2.2 草鱼caspase家族基因的克隆与鉴定
2.2.3 草鱼caspase家族基因及其编码氨基酸的序列结构分析
2.2.4 草鱼caspase家族蛋白结构域分析
2.2.5 草鱼caspase家族成员基因结构分析
2.2.6 草鱼caspase家族成员基因序列的同源性比较
2.2.7 草鱼caspase家族成员基因序列的进化树分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 脂肪细胞分化过程中凋亡特性的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 试验草鱼
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 草鱼前体脂肪细胞获得及培养
3.1.4 细胞分化检测
3.1.5 流式细胞术检测脂肪细胞分化过程中凋亡率变化
3.1.6 Real-time PCR检测相关基因的m RNA的表达
3.1.7 Western Blot检测分化过程中相关蛋白变化
3.1.8 分化过程中凋亡相关蛋白酶活性的变化
3.1.9 数据分析
3.2 结果
3.2.1 草鱼脂肪细胞分化过程中形态学变化
3.2.2 脂肪细胞分化过程中凋亡率的变化
3.2.3 脂肪细胞分化过程中分化标志基因的表达
3.2.4 脂肪细胞分化过程中凋亡相关基因的表达
3.2.5 脂肪细胞分化过程中分化和凋亡相关蛋白的表达
3.2.6 脂肪细胞分化过程中凋亡蛋白酶的活性变化
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 草鱼肝细胞充脂过程中凋亡特性的研究
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试剂
4.1.2 草鱼肝细胞的培养
4.1.3 MTT检测不同浓度油酸对肝细胞活力影响
4.1.4 油红O染色提取法测定脂质含量
4.1.5 BODIPY染色法和DAPI染色法观察肝细胞内脂滴和细胞核变化
4.1.6 流式细胞术检测不同浓度油酸对肝细胞凋亡的影响
4.1.7 Real-time PCR检测相关基因的m RNA的表达
4.1.8 统计分析
4.2 结果与分析
4.2.1 油酸处理对草鱼肝细胞活力的影响
4.2.2 油酸处理对草鱼肝细胞脂质蓄积的影响
4.2.3 油酸处理对草鱼肝细胞凋亡率的影响
4.2.4 油酸处理对草鱼肝细胞脂质生成基因和凋亡相关基因表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 综合讨论与结论
5.1 综合讨论
5.2 结论
5.3 创新点
5.4 下一步研究内容
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3890324
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