拟穴青蟹SpALF6和SpALF7的克

发布时间：2024-03-13 05:30

　　抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharide factor,ALF)是甲壳动物体内主要的抗菌肽分子,属于阳离子抗菌肽家族。该家族抗菌肽具有序列和功能多样性的特点,在抗细菌、真菌、病毒等免疫反应中发挥重要作用。目前,对于该类抗菌肽如何通过序列的多样性影响其功能的多样性,仍缺乏足够的了解。本研究论文从拟穴青蟹体内鉴定了2种非典型的抗脂多糖因子成员,通过序列分析和功能研究,初步阐明了ALF家族成员序列多样性和其免疫功能的关系,揭示了序列多样性对功能多样的性的影响规律。我们研究首先从拟穴青蟹体内鉴定了SpALF6及其变异体SpALF6-V。与该家族大多成员蛋白属于阳离子抗菌肽不同,SpALF6的pI值为6.79,其LPS结合结构域LBD(LPS-binding domain)pI值为6.05,属于非典型的ALF家族成员,而其自然界中变异体SpALF6-V的pI值却为7.98,属于阳离子抗菌肽。生物信息学分析发现,这个变异体的产生是源于特定位点单核苷酸多态性(SNP)。为了研究SNP位点的存在对蛋白质功能的影响,我们对这两个蛋白质进行生物信息学分析,发现这两个氨基酸的突变分别是S...

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【部分图文】：

图2-1.预测的SpALF6的LBD结合域的氨基酸残基的疏水性和pI值

因为SpALF6基因组内有两个SNPs位点的存在,而且这两个突变并非同义突变这两个突变分别是DNA序列上第215位的碱基A突变成了G,第406位的碱基突变成了C，最终导致氨基酸序列第46位的组氨酸（H）突变成了精氨酸（R和第110位的丙氨酸（A）突....

图2-2.(A)cDNA全长序列和预测的SpALF6氨基酸序列

242-2.(A)cDNA全长序列和预测的SpALF6氨基酸序列。阴影部分表示LPS结合域，终子用*表示。红色部分是信号肽序列，H46和A110用方框表示。（B）SpALF6，SpALF6LF6-M序列对比图。SpALF6的变异位点H46和A110....

图2-4.Phyer服务器预测的SpALF6的三维空间结构

ALFhomologsarelistedinthefigure.SpALF6ndsquare,respectively.空间结构ALFPm3成熟肽序列比对结果显示只有显示相似度并不是很高，所以我们用到了测得到的三维结构显示该成熟肽（25aa构，和ALFP....

图2-5.SpALF6组织分布和病原刺激后表达模式分析

上海海洋大学硕士学位论文利用实时定量PCR来检测分析SpALF6的组织分布和实时表达水平。图显示SpALF6主要在血细胞中表达。因此，检测了在金黄色葡萄球菌，副溶血菌，白斑综合征病毒免疫刺激青蟹后，其血细胞中SpALF6的实时表达水平。金黄色葡萄球菌感染后2-....

本文编号：3927265