洪湖碘泡虫ELISA检测方法的建立与初步应用

发布时间：2024-03-17 05:07

　　洪湖碘泡虫造成异育银鲫大规模病变死亡,带来巨大经济损失,因此对该寄生虫病的早期检测尤为重要,但目前并没有洪湖碘泡虫的早期检测方法。本研究精确鉴定了一例洪湖碘泡虫,采用化学方法在不破坏虫体免疫学性质的前提下进行了纯化,并制备了虫体可溶性成分与不溶性成分,借助免疫学手段,初步探索洪湖碘泡虫的免疫原性,根据相关抗原特性建立相应的ELISA检测方法。并以此作为基础,对病鱼进行了实际检测。通过对虫体形态学进行观察加以生物信息学分析后,鉴定了一例洪湖碘泡虫。采用极性有机溶剂洗脱离心法,分离纯化得到纯净的洪湖碘泡虫。经过液氮与温浴反复冻融、超声波破碎提取虫体可溶性蛋白与不溶性抗原成分。两种抗原分别免疫小鼠与豚鼠制备得到多克隆抗体,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、SDS-PAGE蛋白电泳、间接免疫荧光试验(IFAT)对多克隆抗体的免疫学性质进行分析。ELISA测定可溶性成分攻毒组小鼠多抗血清与豚鼠多抗血清效价均达到1:20000以上。不溶成分攻毒组小鼠与豚鼠的多抗血清效价均小于1:50。SDS-PAGE蛋白电泳显示可溶蛋白主要分布于10kDa²00kDa,不溶成分无明显分布...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1洪湖碘泡虫成熟孢子Fig.1.1MaturesporeofHonghuensissp.n.

见图1.1。

图2.1病鱼临床症状Fig.2.1Clinicalsymptomsofsickfish

症状观察瘦，体表粗糙，颜色苍白，黏液分泌较少，眼球外凸鳍条鳃盖下鳃弓近眼端的咽喉部存在大片乳白色囊肿，囊肿质酪样黏稠包囊液。病鱼症状详，见图2.1。

图2.2病鱼咽腔组织苏木精-伊红染色切片（×400）比例尺：50μmFig.2.2DiseasedfishpharyngealcavitytissueHEstainingslice（×400）Scale:50μm

咽腔组织苏木精-伊红染色切片（×400）比hpharyngealcavitytissueHEstainingslice（×咽腔组织苏木精-伊红染色切片（×800）比hpharyngealcavitytissueHEstainingslice（×可量形状测定....

图2.3病鱼咽腔组织苏木精-伊红染色切片（×800）比例尺：25μmFig.2.3DiseasedfishpharyngealcavitytissueHEstainingslice（×800）Scale:25μm

组织苏木精-伊红染色切片（×800）aryngealcavitytissueHEstainingslic量形状测定观呈梭形，拥有两个极囊，大见表2-1，根据显微图绘制的模

本文编号：3930556