拟南芥AtZFN3基因RNA干扰载体的构建与表达

发布时间：2022-01-14 05:44

　　为了构建具有发夹结构的RNAi表达载体来研究拟南芥AtZFN3基因表达的效果。根据拟南芥（Arabidopsis thaliana）锌指蛋白AtZFN3基因序列,设计含有酶切位点的两对特异性引物。以拟南芥cDNA为模板,分别合成用于构建干扰载体的正、反义DNA片段,将正、反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置上,构建含有发夹结构的RNAi载体pART-ZFN3。利用农杆菌介导法,将pART-ZFN3转化到拟南芥中,PCR检测证实获得了5株转基因植株,经荧光定量PCR检测,证明了转基因植株中AtZFN3基因表达量显著低于未转基因的植株。结果表明:具有发夹结构的RNAi载体pART-ZFN3已构建成功,它对拟南芥AtZFN3基因的表达具有抑制作用,为深入分析拟南芥AtZFN3基因功能提供了基础。 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pKA-F-R质粒PCR检测

酶切分析

将质粒pKA-F-R和pART27质粒分别用NotⅠ进行单酶切，纯化回收的目的片段连接转化大肠杆菌，选取具有卡那霉素抗性的单克隆菌落，使用pdk-f和pdk-r作为引物进行PCR检测，结果显示：获得了预期大小的DNA条带。使用NotⅠ对质粒进行单酶切，经电泳分析，得到预期大小一致的条带(图3)。将重组质粒送生物公司测序，结果得知pART-ZFN3质粒构建正确。以上结果表明，成功构建了拟南芥锌指蛋白AtZFN3基因RNAi表达载体。图2 pKA-F-R质粒PCR检测

【参考文献】：
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本文编号：3587924