TMEM16A的表达下调对骨骼肌细胞分化的影响

发布时间：2022-02-09 04:26

　　TMEM16A（Transmembrane Protein 16A）是一种钙离子(Ca²⁺)激活的氯离子通道（Calcium-activated Chloride Channels,CaCCs）,在机体内广泛表达,具有重要的生理功能.迄今为止,TMEM16A在骨骼肌发育中的作用及机制尚无报道.本研究利用TMEM16A特异性抑制剂T16A_inh-A01首次探讨了其表达下调对骨骼肌细胞分化的影响.研究发现,T16A_inh-A01处理显著抑制C2C12和原代成肌细胞的肌分化.进一步研究发现,T16A_inh-A01明显抑制肌分化过程中生肌素Myogenin的表达.研究结果提示,TMEM16A的钙激活氯通道活性可能参与了骨骼肌细胞的分化过程,具体的作用机制有待进一步研究. 

【文章来源】：南京师大学报(自然科学版). 2020,43(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

C2C12和原代成肌细胞分化过程中TMEM16A的表达

T16Ainh-A01(2-[(5-Ethyl-1,6-dihydro-4-methyl-6-oxo-2-pyrimidinyl)thio]-N-[4-(4-methoxyphenyl)-2-thiazolyl]-acetamide,中文名氨基苯基噻唑)是一种TMEM16A的特异性抑制剂(图2A),可以抑制钙离子激活的氯通道活性[17]. 在诱导肌分化时,分化培养基中加入T16Ainh-A01,观察肌管的形成,并利用MF20染色肌球蛋白重链显示分化第4 d的肌管. 结果发现,与DMSO对照相比,在浓度为10 μmol/L、20 μmol/L和50 μmol/L时,T16Ainh-A01对于C2C12和原代成肌细胞的肌分化都有抑制作用,表现为肌管的形态变小和变短(图2B、2D),肌分化指数降低(图2C、2E),其中浓度为 20 μmol/L和 50 μmol/L时抑制作用最为显著. 以上结果提示,C2C12及原代成肌细胞的肌分化过程需要钙离子激活的氯通道活性.2.3 TMEM16A表达下调抑制原代成肌细胞肌管的形成

肌分化主要受MRF(Myogenic Regulatory Factors)家族成员的调节[18],生肌素Myogenin(MyoG)属于MRF家族成员,是肌肉特异性碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,参与骨骼肌发育或肌细胞生成和修复的协调,调节终末肌分化过程[19]. 在前面2.2中用不同浓度的T16Ainh-A01处理C2C12和原代成肌细胞时,20 μmol/L以及50 μmol/L浓度的抑制剂对分化的影响显著,因此选取20 μmol/L进行下面的研究. 在分化培养基中加入20 μmol/L的T16Ainh-A01,在DM1(分化第1 d)和DM3(分化第3 d)时提取蛋白进行 Western blot 分析. 结果发现,MyoG蛋白表达水平均显著低于对照组(图4).图4 T16Ainh-A01抑制C2C12和原代成肌细胞分化中MyoG表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠原代成肌细胞分离、纯化及培养[J]. 熊雷,何衍佶,戴威,赵圆,高彦飞,邓忠良,聂茂.  现代医药卫生. 2017(03)



本文编号：3616368