CRISPR/Cas9技术介导猪基因组单碱基编辑效率的研究

发布时间：2022-02-17 23:17

　　利用国际上最新的两种基于CRISPR/Cas9的BE3（Cytosine base editor,CBE）和ABE7.10（Adenine base editor,ABE）单碱基修饰技术对猪基因组靶基因位点进行编辑效率的分析研究。设计、合成并构建4个猪基因组靶基因位点gRNA表达载体,分别与CBE或ABE共转染PK15细胞,继续培养48 h,结合二代测序技术测定单碱基替换效率和indels发生率。结果表明,单碱基编辑系统BE3和ABE7.10对猪基因组靶位点碱基修饰的活性编辑窗口主要分别为5个核苷酸和4个核苷酸;两套单碱基编辑系统主要对编辑窗口内的目标碱基进行单碱基转换而非indel;两套单碱基编辑系统对猪基因组碱基置换有一定偏好性,其中CMAH、MC1R（1-2）、MC1R（2-1）基因编辑窗口内C→T的效率分别为2.2%、0.4%和1.3%;猪GGTA、MSTN-2窗口内A→G的效率分别为1.4%、1.4%。表明单碱基编辑系统BE3和ABE7.10均能够对猪细胞的基因组靶位点序列进行有效的单碱基置换。 

【文章来源】：湖北农业科学. 2020,59(18)

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞及载体
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 sg RNA设计及活性鉴定
        1.2.2 细胞转染
        1.2.3 靶向文库构建及测序
        1.2.4 测序数据分析
2 结果与分析
    2.1 CRR-sg RNA表达载体构建及活性验证结果
    2.2 靶向文库构建
    2.3 单碱基替换效率分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]An effective strategy to establish a male sterility mutant mini-library by CRISPR/Cas9-mediated knockout of anther-specific genes in rice[J]. Kun Ma,Jingluan Han,Yu Hao,Zhongfang Yang,Junyu Chen,Yao-Guang Liu,Qinlong Zhu,Letian Chen.  Journal of Genetics and Genomics. 2019(05)



本文编号：3630283