Folpcs1基因对尖孢镰刀菌亚麻专化型的无性繁殖和营养生长的调控

发布时间：2022-11-05 15:44

　　背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini （Bolley） Snyder＆Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗（intercalary phialides）产生分生孢子。目的:鉴定pcs1同源基因Folpcs1在镰刀菌中的作用。方法:对Folpcs1的基因组DNA及cDNA测序后,利用Split-Marker基因敲除技术破坏该基因。构建含有潮霉素抗性基因（hph）的基因缺失盒。通过聚乙二醇（PEG）转化野生型原生质体法,获得了Folpcs1基因缺失突变株（ΔFolpcs1）,并利用PCR法进行正负筛选。为了对缺失突变体互补,将pcs1及其上下游侧翼序列构建到pZWH1中后,回复到ΔFolpcs1中。结果:测序结果表明,有一个654bp的内含子,cDNA序列长度为2 846bp。通过观察发现,敲除突变体的生长速率明显降低,培养基中几乎观察不到分生孢子。回复突变体回复了野生型菌株的生长速率及分生孢子产生过程。结论:说明Fol... 

【文章页数】：17 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 试剂
    1.3 实验方法
        1.3.1 尖孢镰刀菌pcs1基因的克隆、测序及末端确定
        1.3.2 引物设计
        1.3.3 Folpcs1基因生物信息学分析
        1.3.4 Folpcs1基因缺失盒的构建
        1.3.5 Folpcs1基因敲除转化子的筛选与鉴定
        1.3.6 Folpcs1基因敲除突变体、外插入以及野生型表型和致病力变化
        1.3.7 Folpcs1基因功能互补测验
        1.3.8 Folpcs1基因互补转化子的筛选与鉴定
        1.3.9 Folpcs1基因回复突变体表型检测
2 结果与分析
    2.1 亚麻专化型尖孢镰刀菌pcs1基因序列的确定
        2.1.1 亚麻专化型尖孢镰刀菌基因组DNA及总RNA的提取
        2.1.2 Folpcs1基因c DNA末端克隆
        2.1.3 Folpcs1基因组DNA与c DNA序列的获得
    2.2 Folpcs1基因生物信息学分析
        2.2.1 同源性分析
        2.2.2 系统进化分析
    2.3 Folpcs1基因的敲除
        2.3.1 Folpcs1基因敲除盒的构建
        2.3.2 转化子的筛选与鉴定
    2.4 Folpcs1基因敲除突变体表型及其致病力
    2.5 Folpcs1基因功能互补测验
        2.5.1 Folpcs1基因重组质粒p ZGH1(pZWH1+Folpcs1)的构建
        2.5.2 重组质粒p ZGH1的筛选
        2.5.3 转化子的筛选与鉴定
    2.6 Folpcs1基因回复突变体表型检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦赤霉菌FGSG08948基因敲除及功能研究[J]. 郭雪芳,侯占铭.  分子植物育种. 2018(08)
[2]小麦赤霉菌FGSG<sub>04871基因敲除及功能研究[J]. 彭海丽,侯占铭.  内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版). 2017(03)
[3]亚麻苗期病害发生特点及防治技术研究[J]. 杨学.  中国麻业. 2003(05)
[4]亚麻枯萎病发生规律及其综合防治措施[J]. 杨学 ,王玉富 ,关凤芝 ,路影 ,宋宪友 ,张福修 ,康庆华 ,刘燕 ,吴广文 ,曲瑞璞.  中国麻业. 2002(01)
[5]尖孢镰刀菌的遗传多态性[J]. 王政逸,李德葆.  植物病理学报. 2000(03)
[6]高抗萎蔫病胡麻品种资源的筛选利用及抗病性遗传浅析[J]. 杨万荣,薄天岳.  华北农学报. 1994(S1)

硕士论文
[1]小麦赤霉菌FgAC1基因敲除及功能研究[D]. 吴彬.内蒙古师范大学 2011
[2]尖孢镰刀菌Qip基因功能初步研究[D]. 程琳.山西师范大学 2015



本文编号：3702883