杜氏盐藻番茄红素ε-环化酶基因DsLYCE表达载体构建及其在烟草中瞬时表达分析

发布时间：2022-11-09 21:54

　　[目的]ε-环化酶（lycopeneε-cyclase,LYCE）可将番茄红素环化,并与番茄红素β-环化酶共同作用合成α-胡萝卜素,参与植物体内类胡萝卜素的合成途径。富含β-胡萝卜素的杜氏盐藻（Dunaliella Salina）LYCE功能还未解析。[方法]本文利用RT-PCR分离杜氏盐藻DsLYCE基因ORF,并克隆到植物表达载体pCAMBIA1303、构建DsLYCE组成型表达载体pCAMBIA1303-DsLYCE。通过农杆菌介导渗入法在烟草叶组织中瞬时表达DsLYCE,鉴定DsLYCE功能。[结果]烟叶生理生化分析显示,与野生型和空载体对照相比,DsLYCE瞬时表达的烟叶组织中类胡萝卜素积累显著提高（P＜0.05）,含量增加了24%。相似地,转DsLYCE基因的烟草叶片中叶绿素a和叶绿素b含量也明显高于野生型空载对照烟草。这表明杜氏盐藻DsLYCE基因异源表达不仅能促进宿主细胞类胡萝卜素的合成与积累,而且还可以改善宿主细胞的光合作用。[结论]本研究为深入解析杜氏盐藻DsLYCE参与类胡萝卜素生物合成的分子机制以及应用于其他植物的色素代谢遗传改良提供科学参考。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 植物材料
    1.2 菌株、质粒及试剂
    1.3 杜氏盐藻总RNA的提取
    1.4 杜氏盐藻LYCE基因的扩增
    1.5 构建植物表达载体pCAMBIA1303+DsLYCE
    1.6 农杆菌介导的烟草瞬时表达分析
    1.7 烟草瞬时表达叶片GUS染色
    1.8 烟草瞬时表达的PCR检测
    1.9 烟草叶片色素提取及测定
2 结果
    2.1 杜氏盐藻LYCE基因cDNA克隆
    2.2 pCAMBIA1303-DsLYCE表达载体的双酶切鉴定
    2.3 农杆菌转化检测结果
    2.4 烟草叶片GUS染色
    2.5 烟草瞬时表达PCR检测结果
    2.6 DsLYCE瞬时表达对烟草叶片类胡萝卜素及叶绿素含量的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]杜氏盐藻LYCB基因克隆及在盐胁迫下的表达分析[J]. 安茜,周雅莉,宋亚楠,岳敏,赵熙宁,王计平,李润植.  山西农业大学学报(自然科学版). 2018(10)
[2]葡萄糖诱导绿色杜氏藻转录组及相关通路差异分析[J]. 朱帅旗,龚一富,刘浩,章丽,王何瑜.  中国生物化学与分子生物学报. 2015(08)
[3]LycE基因对番茄的遗传转化[J]. 抗艳红,季静,吴东,王罡.  北方园艺. 2006(05)

博士论文
[1]玉米类胡萝卜素异构酶和番茄红素ε-环化酶基因的克隆与鉴定[D]. 李群睿.东北师范大学 2010

硕士论文
[1]巴氏杜氏藻类胡萝卜素异构酶基因的分子克隆及外源表达系统的构建[D]. 梁颖婕.华南理工大学 2016
[2]巴氏杜氏藻番茄红素β-环化酶基因的克隆及其启动子的活性研究[D]. 陆燕.华南理工大学 2013
[3]中国水仙花色相关基因ZDS、LYCE的克隆[D]. 江琳玉.福建农林大学 2009



本文编号：3704962