敲除ptsG基因及共表达透明颤菌血红蛋白提高大肠杆菌SHMT产量

发布时间：2023-04-28 00:16

　　利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21(DE₃)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE₃)ΔptsG。构建重组质粒,得到表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE₃)/pET-glyA、BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA,及共表达SHMT和透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)工程菌株BL21(DE₃)ΔptsG/pET-SV。在LB培养基中,BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA菌株与BL21(DE₃)/pET-glyA菌株生长情况没有明显差异,BL21(DE₃)ΔptsG/pET-SV菌株稳定期的OD_{600 nm}值比BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.3%,在LBG培养基中,稳定...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 试剂、试剂盒与引物
        1.1.3 培养基
    1.2 仪器与设备
    1.3 方法
        1.3.1 ptsG基因敲除菌株的构建
        1.3.2 表达载体及工程菌株的构建
        1.3.3 菌株生长测定
        1.3.4 工程菌诱导表达SHMT
        1.3.5 SHMT表达水平及酶活力测定
    1.4 数据统计分析
2 结果与分析
    2.1 ptsG基因敲除
    2.2 重组载体与工程菌株的构建
    2.3 重组菌株生长曲线
    2.4 工程菌株的诱导表达及酶活力分析
3 讨论



本文编号：3803359