快速核酸扩增及可视化策略用于食源性致病菌和转基因作物检测
发布时间：2023-09-17 08:11
核酸扩增检测技术通过对模板分子进行百万倍扩增来实现对核酸的高灵敏检测,在食品安全检测领域发挥着重要作用。但目前的核酸扩增检测技术主要局限于实验室应用,不适用于现场快速检测。本课题以食源性致病菌和转基因作物为研究对象,从核酸提取、核酸扩增和核酸检测三个方面展开研究,开发了快速、简便、可视化的检测方法用于食品安全快速检测,并且开发了可视化的DNA分子计数方法对样本中的模板分子进行计数。主要研究内容及结果如下:(1)本课题采用环介导恒温扩增和基于磷酸根的可视化检测方法对加标对虾样本中的副溶血性弧菌进行快速检测。首先,采用棉签擦拭加标对虾样本进行取样;然后,采用NaOH溶液对获得的样本进行快速细胞裂解,并将细胞裂解液稀释10倍后直接作为模板进行LAMP扩增;最后采用磷酸根比色法对扩增结果进行可视化检测。结果显示,该可视化检测方法对纯培养的副溶血性弧菌的检测限为2.63×103 CFU/mL,对加标对虾样本中的副溶血性弧菌的检测限为3.00×103 CFU/g。采用传统菌落培养计数法做为标准对照,对151个对虾样本进行可视化检测。结果显示可视化检测方法...
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
英文缩略表
1 绪论
1.1 课题背景
1.1.1 食源性致病菌快速检测重要性
1.1.2 转基因作物快速检测重要性
1.1.3 本节小结
1.2 核酸扩增检测方法的基本模块
1.2.1 核酸提取
1.2.2 核酸扩增
1.2.3 核酸检测
1.2.4 本节小结
1.3 新型核酸扩增方法及应用进展
1.3.1 环介导恒温扩增技术
1.3.2 重组聚合酶扩增技术
1.3.3 快速PCR扩增技术
1.4 核酸终点检测面临的问题
1.5 研究目的、内容和技术路线
1.5.1 研究目的和内容
1.5.2 技术路线
1.6 本章小结
2 热块上的核酸恒温扩增与比色法可视化检测方法建立
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 材料和试剂
2.2.2 仪器设备
2.2.3 实验方法
2.3 结果与讨论
2.3.1 LAMP扩增灵敏度和特异性评估
2.3.2 快速核酸提取方法的灵敏度评估
2.3.3 棉签擦拭取样检测加标对虾样本中的副溶血性弧菌
2.3.4 棉签擦拭取样法与传统匀质取样法灵敏度比较
2.3.5 磷酸根比色法检测加标对虾样本中的副溶血性弧菌
2.4 本章小结
3 交叉引物恒温扩增加速剂探究及便携式、防污染试纸条装置开发
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 材料和试剂
3.2.2 仪器设备
3.2.3 实验方法
3.3 结果与讨论
3.3.1 普鲁兰多糖对CPA扩增加速作用探究
3.3.2 普鲁兰多糖作为CPA扩增加速剂用于转基因大米DNA检测
3.3.3 密闭性、便携式、防污染试纸条装置开发
3.4 本章小结
4 无需热块的核酸恒温扩增及荧光可视化检测方法建立
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 材料和试剂
4.2.2 仪器设备
4.2.3 实验方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 不同长度的引物对RPA扩增的影响
4.3.2 RPA扩增特异性和灵敏度测定
4.3.3 RPA扩增对非纯化DNA模板的兼容性评估
4.3.4 体温触发RPA扩增的可行性评估
4.3.5 荧光可视化检测的可行性评估
4.3.6 体温触发的RPA扩增及可视化检测用于GTS40-3-2 转基因大豆筛查
4.3.7 一体化非开盖装置用于RPA可视化检测
4.4 本章小结
5 快速PCR扩增用于可视化DNA分子计数方法建立
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 材料和试剂
5.2.2 仪器设备
5.2.3 实验方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 细柔性塑料管中的热传导过程建模分析
5.3.2 快速PCR扩增时样本温度实时变化过程
5.3.3 快速PCR扩增体系探究
5.3.4 快速PCR扩增的灵敏度测定
5.3.5 扩散和对流效应对扩增子荧光簇的影响
5.3.6 扩增子荧光簇数目与DNA分子个数关系
5.3.7 快速PCR扩增用于单分子水平DNA检测的可靠性评估
5.4 本章小结
6 全文总结与展望
6.1 主要研究结论
6.2 主要创新点
6.3 进一步研究展望
参考文献
作者简历
本文编号：3847342
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
英文缩略表
1 绪论
1.1 课题背景
1.1.1 食源性致病菌快速检测重要性
1.1.2 转基因作物快速检测重要性
1.1.3 本节小结
1.2 核酸扩增检测方法的基本模块
1.2.1 核酸提取
1.2.2 核酸扩增
1.2.3 核酸检测
1.2.4 本节小结
1.3 新型核酸扩增方法及应用进展
1.3.1 环介导恒温扩增技术
1.3.2 重组聚合酶扩增技术
1.3.3 快速PCR扩增技术
1.4 核酸终点检测面临的问题
1.5 研究目的、内容和技术路线
1.5.1 研究目的和内容
1.5.2 技术路线
1.6 本章小结
2 热块上的核酸恒温扩增与比色法可视化检测方法建立
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 材料和试剂
2.2.2 仪器设备
2.2.3 实验方法
2.3 结果与讨论
2.3.1 LAMP扩增灵敏度和特异性评估
2.3.2 快速核酸提取方法的灵敏度评估
2.3.3 棉签擦拭取样检测加标对虾样本中的副溶血性弧菌
2.3.4 棉签擦拭取样法与传统匀质取样法灵敏度比较
2.3.5 磷酸根比色法检测加标对虾样本中的副溶血性弧菌
2.4 本章小结
3 交叉引物恒温扩增加速剂探究及便携式、防污染试纸条装置开发
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 材料和试剂
3.2.2 仪器设备
3.2.3 实验方法
3.3 结果与讨论
3.3.1 普鲁兰多糖对CPA扩增加速作用探究
3.3.2 普鲁兰多糖作为CPA扩增加速剂用于转基因大米DNA检测
3.3.3 密闭性、便携式、防污染试纸条装置开发
3.4 本章小结
4 无需热块的核酸恒温扩增及荧光可视化检测方法建立
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 材料和试剂
4.2.2 仪器设备
4.2.3 实验方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 不同长度的引物对RPA扩增的影响
4.3.2 RPA扩增特异性和灵敏度测定
4.3.3 RPA扩增对非纯化DNA模板的兼容性评估
4.3.4 体温触发RPA扩增的可行性评估
4.3.5 荧光可视化检测的可行性评估
4.3.6 体温触发的RPA扩增及可视化检测用于GTS40-3-2 转基因大豆筛查
4.3.7 一体化非开盖装置用于RPA可视化检测
4.4 本章小结
5 快速PCR扩增用于可视化DNA分子计数方法建立
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 材料和试剂
5.2.2 仪器设备
5.2.3 实验方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 细柔性塑料管中的热传导过程建模分析
5.3.2 快速PCR扩增时样本温度实时变化过程
5.3.3 快速PCR扩增体系探究
5.3.4 快速PCR扩增的灵敏度测定
5.3.5 扩散和对流效应对扩增子荧光簇的影响
5.3.6 扩增子荧光簇数目与DNA分子个数关系
5.3.7 快速PCR扩增用于单分子水平DNA检测的可靠性评估
5.4 本章小结
6 全文总结与展望
6.1 主要研究结论
6.2 主要创新点
6.3 进一步研究展望
参考文献
作者简历
本文编号：3847342
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3847342.html