基于双载体电路的布尔逻辑门构建及功效评价

发布时间：2021-03-15 22:51

　　目的:构建及比对分属于激活和抑制型中的不同核糖开关的调控功效,为实现基因电路的精准调控奠定基础;利用多元基因调控元件设计布尔逻辑门模型构建基因电路,引入复杂的逻辑运算实现目的基因表达的精确调控,进而优化特定的代谢途径。方法:1、构建由不同核糖开关（addA与M6,TPP与btuB）调控的绿色荧光蛋白amcyan表达载体,将目的载体转入MG1655菌株中,通过荧光表达量、RT-qPCR分析在不同IPTG浓度诱导下的amcyan表达,与未含有IPTG诱导的表达载体的表达量进行比较,选择合适的IPTG浓度对后续实验进行调控;在上述优化后的IPTG浓度诱导下,对于不同核糖开关添加相对应的配体物,并以不同的配体物浓度去调控绿色荧光蛋白amcyan的表达,选择出addA与M6,TPP与btuB核糖开关的最佳配体物诱导浓度,并进行动态调控效能分析。2、构建基因电路逻辑门模型,在双载体电路中利用lac启动子,核糖开关（M6,addA,TPP,btuB,LysC,c-di-GMP）,噬菌体tR1转录终止子,Pbe启动子、受控基因(pleD,lysC^for)及报道基因amcyan组建... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

lac-btuB-amcyan融合片段凝胶电泳Figure1-1Thegelelectropherogramsoflac-btuB-amcyanfusionfragments

菌株pVA单克隆平板Figure1-3ThemonoclonalplateofstrainpVA

不同时间段荧光强度检测结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]环二鸟苷单磷酸核糖开关的结构与功能[J]. 李新风,陈芳,肖金凤,何进.  生物工程学报. 2017(09)



本文编号：3084952