人血浆及其外泌体组分的糖基化蛋白质组学研究

发布时间：2022-11-04 22:01

　　蛋白质糖基化是生命体最重要的翻译后修饰之一,糖蛋白几乎参与了所有重要的生命过程。蛋白质糖基化主要常见的类型有N-糖基化和O-糖基化。糖基化的修饰情况与蛋白质本身和外部客观环境紧密相关,本论文致力于发展不同生物样本的糖基化修饰分析方法,针对血浆中的唾液酸化糖肽、内源性糖基化肽段以及尿液外泌体的提取、富集及鉴定等问题展开工作,实现了对血清唾液酸糖肽的特异性富集鉴定、血浆内源性完整N/O-糖基化肽段首次大规模鉴定分析,建立了尿液外泌体与血浆外泌体蛋白之间的相关性,并将其应用于临床肝癌患者的样品分析。针对血清中唾液酸糖基化修饰丰度低和富集特异性低的问题,我们发展了一种多组氨酸修饰的聚合物微球,利用其具有的静电作用、亲水作用以及多组氨酸之间的协同作用,可以实现对唾液酸糖基化肽段的特异性富集,并成功从4mL人源血清样品中富集到510条完整糖基化肽段,其中唾液酸化糖基化肽段的特异性高达94.7%,实现了复杂生物样本中唾液酸糖基化修饰的特异性富集和分析。针对人源血清中的内源性糖基化肽段的低丰度以及难鉴定的问题,我们发展了一种利用酸热和超滤的方法提取内源性肽段,再利用亲水相互作用实现对糖基化肽段的高效富... 

【文章页数】：156 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 蛋白质组学
        1.1.1 蛋白质组学概述
        1.1.2 蛋白质组学的研究策略
        1.1.3 基于质谱技术的蛋白质组学研究策略
        1.1.4 基于质谱技术的蛋白质组学定量技术
    1.2 糖基化蛋白质组学
        1.2.1 糖基化蛋白质组学概述
        1.2.2 糖基化蛋白质组学的研究策略
    1.3 外泌体蛋白质组学
        1.3.1 外泌体蛋白质组学概述
        1.3.2 外泌体蛋白质组学的研究策略
        1.3.3 外泌体糖基化蛋白质组学的研究策略
    1.4 论文设计思路
第2章 唾液酸化糖肽富集新材料的制备及应用
    2.1 研究背景
    2.2 实验部分
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 材料制备与表征
        2.2.3 标准蛋白和血清样品的前处理
        2.2.4 唾液酸化糖肽富集
        2.2.5 MHM回收率和富集容量评价
        2.2.6 唾液酸糖肽质谱分析
        2.2.7 数据检索与分析
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 制备MHM材料的合成和表征
        2.3.2 MHM材料富集唾液酸糖肽的可行性评估
        2.3.3 MHM材料富集复杂样品的应用
    2.4 本章小结
第3章 内源性完整糖肽的规模化鉴定
    3.1 研究背景
    3.2 实验部分
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 内源性肽段的提取
        3.2.3 内源性糖基化肽段的富集
        3.2.4 质谱分析
        3.2.5 数据检索和分析
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 内源性糖基化肽段研究策略
        3.3.2 内源性糖基化肽段样品处理及鉴定
        3.3.3 内源性糖基化肽段的生物信息分析
    3.4 小结
第4章 血浆与尿液外泌体蛋白质组相关性及其糖基化修饰的研究
    4.1 研究背景
    4.2 实验部分
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 外泌体提取与蛋白质酶解
        4.2.3 外泌体糖基化肽段富集
        4.2.4 质谱分析
        4.2.5 数据检索与分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 尿液与血浆外泌体蛋白质组相关性建立与评价
        4.3.2 肝癌患者尿液与血浆外泌体蛋白质组相关性建立与分析
        4.3.3 肝癌患者尿液外泌体糖基化定量蛋白质组分析
    4.4 小结
第5章 总结与展望
参考文献
作者简介在学期内发表的学术论文与研究成果
致谢



本文编号：3701408