杠柳苷元诱导结肠癌细胞凋亡的作用及机制研究

发布时间：2023-04-19 02:13

　　结直肠癌(CRC)是全球范围内癌症致死的第三大病因。在中国,结直肠癌是导致恶性肿瘤死亡的第四大原因。目前结直肠癌的主要治疗手段为手术和化学疗法相结合。但是,由于患者对化疗药物的抗药性不仅降低了癌症的治愈率,还给患者带来了严重的不良预后。因此,开发安全、有效的新型抗癌药物已是必然趋势。天然化合物是抗癌新药物的主要来源。杠柳苷元(Periplogenin,PPG)是一种从传统中草药香加皮中提取的天然化合物。目前,关于PPG诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究尚无报道。本研究通过MTT法检测PPG对肿瘤细胞活性的影响。以人结肠癌HCT116细胞为例,通过TUNEL法、流式细胞术、蛋白免疫印迹(Western blot)、siRNA干扰等手段揭示了PPG诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制,结果包括以下四个方面:(1)PPG抑制肿瘤细胞增殖,诱导HCT116细胞凋亡。MTT法检测PPG对人结肠癌细胞HCT116、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela、乳腺癌细胞MCF7和正常细胞系-大鼠隐窝上皮IEC6细胞活性的影响,结果显示PPG以时间和剂量依赖的方式抑制HCT116、HepG2、Hela和MCF7的增殖,...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1 癌症及其治疗方法
        1.1 癌症概述
        1.2 结直肠癌
        1.3 结直肠癌的治疗方法
    2 杠柳苷元
        2.1 天然产物概述
        2.2 细胞凋亡
        2.3 杠柳苷元
        2.4 杠柳苷元的研究进展
    3 活性氧与细胞凋亡
        3.1 活性氧概述
        3.2 活性氧与细胞凋亡
    4 内质网应激与细胞凋亡
        4.1 内质网应激概述
        4.2 内质网应激通路简介
        4.3 内质网应激与细胞凋亡
        4.4 ROS与内质网应激
    5 本论文研究的目的及意义
第二章 杠柳苷元对结肠癌细胞凋亡的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 细胞系
            1.1.2 杠柳苷元
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器
            1.1.5 试剂配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 杠柳苷元药物配制
            1.2.2 细胞培养
            1.2.3 细胞复苏与冻存
            1.2.4 MTT检测细胞活性
            1.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI)
            1.2.6 TUNEL 染色
            1.2.7 蛋白免疫印迹(Western blot)
        1.3 统计学分析
    2 结果
        2.1 杠柳苷元显著抑制肿瘤细胞活性
        2.2 杠柳苷元诱导结肠癌细胞凋亡
        2.3 杠柳苷元对肿瘤细胞中凋亡标志蛋白表达的影响
    3 讨论
第三章 杠柳苷元通过ROS途径诱导结肠癌细胞凋亡
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要仪器
            1.1.3 溶剂配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 流式细胞术检测ROS水平变化
            1.2.3 MTT实验检测抗氧化剂NAC对 HCT116 细胞增殖的影响
        1.3 统计学分析
    2 结果
        2.1 PPG对 HCT116 细胞中ROS水平的影响
        2.2 抗氧化剂NAC对肿瘤细胞活性的影响
        2.3 抗氧化剂NAC对杠柳苷元诱导的细胞凋亡的影响
    3 讨论
第四章 杠柳苷元通过ROS介导的内质网应激途径诱导结肠癌细胞凋亡
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂
        1.2 RNAi序列
        1.3 实验方法
            1.3.1 细胞培养
            1.3.2 细胞转染
        1.4 统计学分析
    2 结果
        2.1 杠柳苷元对肿瘤细胞内质网应激相关蛋白表达的影响
        2.2 特异siRNA干扰CHOP/JNK后对PPG诱导细胞凋亡的影响
        2.3 ROS是 PPG诱导的细胞凋亡中ER应激的上游信号
    3 讨论
第五章 总结与展望
    1 总结
    2 展望
参考文献
致谢
个人简况及联系方式



本文编号：3793512