miRNAs对TBX5的靶向调控及其遗传变异的调控差异在先天性心脏病中的作用

  本文关键词：北京鸭胚胎期胸肌发育相关基因与miRNAs表达模式鉴定及其互作关系研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《复旦大学》 2012年

miRNAs对TBX5的靶向调控及其遗传变异的调控差异在先天性心脏病中的作用

王凤  

【摘要】：先天性心脏病(Congenital heart disease, CHD)是出生缺陷中最常见的类型,已成为婴幼儿死亡和残疾的首要原因。开展其相关的病因和发病机制的研究,是早期发现和早期干预的重要策略。目前已知多种转录因子与维持胚胎心脏的正常发育密切相关。转录因子TBX5基因编码区序列突变是在人类第一个发现的致病性突变,可引起包括房间隔缺损(ASD)、室间隔缺损(VSD)和传导系统异常等在内的Holt-Oram综合征。长期以来,TBX5与人类CHD的相关研究侧重于基因编码区,关注因氨基酸变化导致的基因功能异常是否会增加CHD易感性,而很少对基因调控区尤其是3'UTR进行系统研究来探讨基因剂量与CHD的关系。为了探讨TBX5 3'UTR的遗传变异和CHD易感性是否存在联系,我们在山东和上海两个省市收集了总计1,177例CHD病例和990例健康对照样本,挑选出其中32个样本对TBX5 3'UTR进行了测序,根据测序结果挑选最小等位基因频率(MAF)大于5%的SNPs,在两个人群中分别进行基因分型和关联分析。我们发现,TBX53'UTR rs6489956 CT多态位点可显著增加先心病的患病风险,并在两个人群中得到了一致的结果。其中,T等位基因为风险因子,与CC基因型相比,CT-TT基因型能提高1.9倍的患病风险(adjusted OR= 1.90,95%Cl= 1.52-2.38, P=8.79×10-9)。分层分析发现,该位点与多种类型CHD存在关联,且在室间隔缺损(VSD)中较为突出(CT:OR=1.61,95%CI=1.23-2.10；TT:OR=2.43,95% CI=1.04-5.65,P=4×10-4)。在找到与疾病易感性相关的阳性位点后,我们进一步对其进行了功能上的分析。qRT-PCR实验表明,携带rs6489956 T等位基因的CT-TT基因型患病个体心脏组织TBX5 mRNA的表达水平仅为CC基因型个体的49.3%。细胞水平的荧光素酶报告基因检测实验显示,miR-9和miR-30a对rs6489956 CT不同等位基因的负调控存在差异。进一步的qRT-PCR和Western blot表明,该多态由C到T的变化会增强miR-9和miR-30a对TBX5基因的抑制作用,表现为miR-9引起细胞内源TBX5 mRNA和蛋白水平的表达下调,而miR-30a则主要抑制TBX5蛋白翻译。为了鉴定更多的靶向调控TBX5的miRNAs,根据生物信息学的预测结果,我们通过细胞水平的荧光素酶筛选实验发现miR-10a和miR-10b均可引起荧光素酶表达下调。随后的qRT-PCR和Western blot证实, miR-10a和miR-10b对HEK 293T细胞内源TBX5 mRNA的表达无显著影响,但可引起其蛋白水平的显著下调；而miR-10a或miR-10b抑制剂则上调TBX5蛋白水平的表达。ANF是TBX5的下游基因之一,其启动子区具有TBX5的结合位点。因此,我们进一步检测了miR-10a/10b对于ANF的作用。HEK 293T细胞转染实验证实,miR-10a/10b均可显著抑制荧光素酶的活性,而在内源低表达TBX5的Hela细胞中却未发现此现象。随后的qRT-PCR结果显示miR-10a/10b可以下调HEK293T细胞内源ANF mRNA的表达。通过以上研究,我们首次鉴定出TBX5 3'UTR rs6489956 CT多态可显著增加CHD的患病风险,miR-9和miR-30a对T等位基因的负调控作用更为显著,从而导致TBX5基因的表达差异；首次发现miR-10a/10b能够通过直接靶向TBX5 3'UTR而抑制TBX5蛋白水平的表达和下游ANF的转录。

【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R725.4
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;Impact of tiny miRNAs on cancers[J];World Journal of Gastroenterology;2007年04期

2 宋宝;宋现让;刘杰;魏玲;;miRNAs及其靶基因的识别[J];基础医学与临床;2007年09期

3 ;放疗和miRNAs两者关系的研究进展(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2012年05期

4 王宁;黄辰;姚嘉宜;艾婷;李围围;付学海;宋丽萍;;肺癌相关miRNAs研究进展[J];现代肿瘤医学;2012年05期

5 ;Identification of deregulated miRNAs and their targets in hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年38期

6 William CS CHO;南娟;;miRNAs作为癌症预测和预后标志物的巨大潜能[J];中国肺癌杂志;2013年01期

7 李长贵;纪艳;;miRNAs和内分泌疾病研究进展[J];中华医学信息导报;2006年21期

8 William CS CHO;南娟;丁燕;;miRNAs在肺癌中的作用[J];中国肺癌杂志;2009年12期

9 Wen Luo,;Qinghua Nie;Xiquan Zhang;;MicroRNAs Involved in Skeletal Muscle Differentiation[J];遗传学报;2013年03期

10 ;Small but influential:the role of microRNAs on gene regulatory network and 3′UTR evolution[J];遗传学报;2009年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 ;A potential role for Chlamydomonas miRNAs in response to environmental changes[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年

2 Ping Xuan;Maozu Guo;Yangchao Huang;;MaturePred:Efficient Identification of MicroRNAs within Novel Plant Pre-miRNAs[A];第五届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2012年

3 Zhen-Dong Xiao;Li-Ting Diao;Jian-Hua Yang;Hui Xu;Mian-Bo Huang;Yong-Jin Deng;Hui Zhou;Liang-Hu Qu;;Systematical identification of cis-elements orchestrating the expressions of miRNAs in humans[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

4 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年

5 任波;马迪;李毅;;地高辛标记探针结合化学发光技术快速灵敏检测植物总RNA中的miRNAs方法[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文摘要集[C];2005年

6 任波;马迪;李毅;;地高辛标记探针结合化学发光技术快速灵敏检测植物总RNA中的miRNAs方法[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年

7 戚鹏;韩金祥;鲁艳芹;王传玺;栾中华;卜范峰;;病毒编码的miRNAs:基因表达新的调控因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

8 ;Bioinformatic identification and expression analysis of new microRNAs from Medicago truncatula[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

9 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年

10 ;miRNAs involved in Tau expression of BMSCs induced neurons[A];中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会论文摘要集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 江尚;[N];中国医药报;2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈健德;新生儿脓毒症miRNAs表达谱及其免疫调节作用研究[D];复旦大学;2014年

2 A.B.M.Khaldun;[D];中国科学院研究生院(武汉植物园);2015年

3 成鹰;大肠杆菌和布鲁氏菌脂多糖刺激条件下巨噬细胞差异表达miRNAs的鉴定及其作用机制[D];海南大学;2014年

4 王奕;MiRNAs在白癜风外周血单个核细胞中的表达及miR-3940-5p对T细胞作用机制的研究[D];山东大学;2015年

5 陈科;小鼠子宫内膜mRNAs和miRNAs时空表达与胚胎着床的关系及SPOP对基质细胞蜕膜化的影响[D];重庆医科大学;2015年

6 陈芳;鹅肥肝生成相关miRNAs、基因的鉴定及功能研究和就巢性相关miRNAs的鉴定[D];南京农业大学;2014年

7 顾丽红;北京鸭胚胎期胸肌发育相关基因与miRNAs表达模式鉴定及其互作关系研究[D];西北农林科技大学;2015年

8 侯冬霞;游离脂肪酸在脂肪组织胰岛素抵抗中的作用研究及Solexa技术在miRNAs检测中的应用研究[D];南京大学;2011年

9 李菁;分泌的miRNAs在2型糖尿病和血管再生中的生物学功能研究[D];南京大学;2011年

10 王凤;miRNAs对TBX5的靶向调控及其遗传变异的调控差异在先天性心脏病中的作用[D];复旦大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 姜青华;丹参miRNAs组织特异表达谱及其靶基因鉴定[D];杭州师范大学;2015年

2 刘元会;抑郁患者脑脊液和血清中差异性miRNAs鉴定的临床研究[D];四川医科大学;2015年

3 贾文慧;宫颈癌及子宫内膜癌血清miRNAs的研究[D];南京大学;2013年

4 许成辰;不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7细胞内miRNAs表达谱及相关miRNAs对癌细胞生物学行为的影响[D];安徽医科大学;2015年

5 曹文婷;奶山羊乳腺组织miRNAs的鉴定、筛选及功能的初步研究[D];西北农林科技大学;2015年

6 刘帅帅;循环miRNAs检测对肝癌诊断价值的meta分析[D];蚌埠医学院;2015年

7 王蕊;喉癌相关miRNAs的筛选及其功能的初步研究[D];南华大学;2015年

8 雷彬;大白猪和二花脸猪排卵前卵泡差异表达miRNAs及其靶基因鉴定[D];华中农业大学;2013年

9 葛莹;绵羊不同发情状态下松果体若干miRNAs表达差异及其与AANAT靶关系鉴定[D];扬州大学;2015年

10 汤自征;RA-FLS的迁移、侵袭及RA相关miRNAs表达水平的检测[D];扬州大学;2015年

  本文关键词：北京鸭胚胎期胸肌发育相关基因与miRNAs表达模式鉴定及其互作关系研究，由笔耕文化传播整理发布。