稻瘟病菌Mps1羧基端结构域调节自身及与其他蛋白质相互作用的结构基础
发布时间：2022-01-21 09:13
稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）是研究植物与病原菌相互作用的重要模式病原真菌,由其引起的稻瘟病是一种世界性的病害。Mps1位于稻瘟病菌MoMck1-MoMkk1-Mps1 MAPK信号通路的最下游,是稻瘟病菌附着胞侵入和扩展所必需的,通过磷酸化作用来调控稻瘟病菌的致病性。Mps1通过与其上游的激酶激酶MoMKK1和磷酸酶Pmp1的相互作用来调节其磷酸化水平。目前,Mps1及其在其他真菌中同源蛋白质的三维空间结构尚未见报道,且与上游激酶激酶和磷酸酶之间相互作用的机制及其调控磷酸化作用的结构基础均不清楚。为此,作者开展了与Mps1相关的结构生物学研究,主要取得了以下结果:1.开展了 Mps1目标蛋白质的重组表达与纯化,制备了纯度较高、稳定性较好、状态较为均一的目标蛋白质样品:采用座滴式气相扩散法对目标蛋白质进行了晶体生长条件的筛选与优化,获得了大小合适、可用于衍射的Mps1蛋白质晶体;通过X-射线衍射收到了高分辨率的蛋白质晶体衍射数据,并以同源蛋白质（ERK2）的结构为模板采用分子置换的方法得到了分辨率为1.99 A的Mps1蛋白质晶体结构。2.通过分析Mps1的蛋白质晶体...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【图文】：
图１－Ｉ稻瘟病菌的侵染循环（Ｄｅａｎ扣ａ／．，?２０１２）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｉｃｅ?ｂｌａｓｔ?ｆｕｎｇｕｓ?（Ｄｅａｎ?ｅｔ?ａ／．，?２０１２）??在真核生物体内普遍存在ＭＡＰＫ信号通路，它主要是通过对蛋白质激酶中的丝氨酸（Ｓｅｒｉｎｅ，??Ｓｅｒ／Ｓ）或苏氨酸（Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ，Ｔｈｒ／Ｔ）?／酪氨酸（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ，?Ｔｙｒ／Ｙ）等磷酸化位点的磷酸化作用，??．
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质在含有较高咪唑浓度的缓冲液（２０?ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ，?２００?ｍＭ咪??挫；２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭ?ＮａＣｌ，?３００ｍＭ?咪唑：２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭＮａＣｌ，?５００ｍＭ?咪唑）中??能够洗脱下来，且在?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ、２００?ｍＭ?咪唑和?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０ｍＭ?ＮａＣｌ、??３００?ｍＭ咪唑缓冲液中能够获得大量的目标蛋白质样品，即通过亲和层析技术可以获得纯度较高、??稳定性较好的Ｍｐｓ?１目标蛋白质样品（图３－２）。??对照?ｉ秀导上消沉淀穿出?丨丨ｒｋｃｒ?２（丨?４０?“?（丨?２（Ｍ＞?川（丨?５００?ｋｌ）？??■Ｕｓ?龜二?－??—??着?一２？??零??图３－２稻瘟病菌Ｍｐｓｌ亲和层析后的１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测胶图??Ｆｉｇ．?３－２?１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?Ｍｐｓｌ?ａｆｔｅｒ?ａｆｆｉｎｉｔｙ??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ??４５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国农作物病虫害防控科技的发展方向[J]. 吴孔明. 农学学报. 2018(01)
[2]分析超速离心技术及其在分子生物学中的应用[J]. 周芳,肖媛,左艳霞,李婷婷. 生命科学研究. 2016(01)
[3]玉米大斑病菌MAPK超家族的全基因组鉴定及途径模型建立[J]. 巩校东,张晓玉,田兰,王星懿,李坡,张盼,王玥,范永山,韩建民,谷守芹,董金皋. 中国农业科学. 2014(09)
[4]哺乳动物细胞高效表达系统研究进展[J]. 张国强,刘志刚,俞炜源. 生物技术通讯. 2005(01)
[5]外源蛋白质表达系统类型的研究进展[J]. 张小霞,严卫星,徐海滨. 国外医学(卫生学分册). 2004(04)
[6]昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展[J]. 刘高强,章克昌,王晓玲,魏美才. 中国生物工程杂志. 2004(07)
[7]真核表达系统的研究进展[J]. 经络,陈勇. 浙江省医学科学院学报. 2003 (03)
本文编号：3599994
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【图文】：
图１－Ｉ稻瘟病菌的侵染循环（Ｄｅａｎ扣ａ／．，?２０１２）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｉｃｅ?ｂｌａｓｔ?ｆｕｎｇｕｓ?（Ｄｅａｎ?ｅｔ?ａ／．，?２０１２）??在真核生物体内普遍存在ＭＡＰＫ信号通路，它主要是通过对蛋白质激酶中的丝氨酸（Ｓｅｒｉｎｅ，??Ｓｅｒ／Ｓ）或苏氨酸（Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ，Ｔｈｒ／Ｔ）?／酪氨酸（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ，?Ｔｙｒ／Ｙ）等磷酸化位点的磷酸化作用，??．
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质在含有较高咪唑浓度的缓冲液（２０?ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ，?２００?ｍＭ咪??挫；２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭ?ＮａＣｌ，?３００ｍＭ?咪唑：２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭＮａＣｌ，?５００ｍＭ?咪唑）中??能够洗脱下来，且在?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ、２００?ｍＭ?咪唑和?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０ｍＭ?ＮａＣｌ、??３００?ｍＭ咪唑缓冲液中能够获得大量的目标蛋白质样品，即通过亲和层析技术可以获得纯度较高、??稳定性较好的Ｍｐｓ?１目标蛋白质样品（图３－２）。??对照?ｉ秀导上消沉淀穿出?丨丨ｒｋｃｒ?２（丨?４０?“?（丨?２（Ｍ＞?川（丨?５００?ｋｌ）？??■Ｕｓ?龜二?－??—??着?一２？??零??图３－２稻瘟病菌Ｍｐｓｌ亲和层析后的１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测胶图??Ｆｉｇ．?３－２?１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?Ｍｐｓｌ?ａｆｔｅｒ?ａｆｆｉｎｉｔｙ??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ??４５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国农作物病虫害防控科技的发展方向[J]. 吴孔明. 农学学报. 2018(01)
[2]分析超速离心技术及其在分子生物学中的应用[J]. 周芳,肖媛,左艳霞,李婷婷. 生命科学研究. 2016(01)
[3]玉米大斑病菌MAPK超家族的全基因组鉴定及途径模型建立[J]. 巩校东,张晓玉,田兰,王星懿,李坡,张盼,王玥,范永山,韩建民,谷守芹,董金皋. 中国农业科学. 2014(09)
[4]哺乳动物细胞高效表达系统研究进展[J]. 张国强,刘志刚,俞炜源. 生物技术通讯. 2005(01)
[5]外源蛋白质表达系统类型的研究进展[J]. 张小霞,严卫星,徐海滨. 国外医学(卫生学分册). 2004(04)
[6]昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展[J]. 刘高强,章克昌,王晓玲,魏美才. 中国生物工程杂志. 2004(07)
[7]真核表达系统的研究进展[J]. 经络,陈勇. 浙江省医学科学院学报. 2003 (03)
本文编号：3599994
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