维生素B6通过miRNA调控獭兔毛囊发育作用机制的研究
发布时间：2022-02-21 20:39
獭兔是著名的裘皮用兔,主要产品是獭兔皮,具有重要的经济价值。被毛密度是评定獭兔皮张质量的重要指标之一。近年来,如何提高獭兔皮张质量中的被毛密度成为獭兔研究中的热点。被毛由毛囊生成,毛囊是皮肤附属器官,由表皮和真皮相互作用形成,能够控制被毛生长,且具有独特的生理结构和周期性生长的特性。毛囊的形成与分化过程中,有毛乳头、毛母质、内根鞘、外根鞘等20多种不同类型的细胞参与。毛乳头细胞是动物皮肤中的一类特异化的间充质来源的细胞,在毛囊周期生长变化过程中发挥重要调控作用,是整个毛囊中直接参与毛囊周期生长调控的关键组分。miRNA是大小约为2024个核苷酸的一类非编码小分子RNA,近年的研究报道miRNA在小鼠、大鼠、山羊和绵羊等多种哺乳动物毛囊形态发生,毛囊干细胞增殖分化和凋亡中发挥了重要的调控作用。本课题首先对獭兔皮肤毛乳头细胞进行分离培养鉴定,然后对不同被毛密度獭兔毛乳头细胞进行差异表达的miRNA筛选,最后对维生素B6通过miRNA调控獭兔毛囊发育作用机制进行研究,以期为提高獭兔皮张质量提供新的思路和线索。研究的主要内容如下:1.獭兔皮肤毛乳头细胞的分离培养及鉴定选取...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：169 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 獭兔生产现状及皮张质量评定
1.1.1 獭兔生产现状
1.1.2 獭兔皮张质量评定
1.2 毛乳头细胞在毛囊发育中作用
1.2.1 皮肤毛囊结构及功能
1.2.2 毛乳头细胞与毛囊发育
1.2.3 毛乳头细胞与毛囊周期性生长
1.3 毛囊体外培养的研究模型及研究现状
1.3.1 毛囊体外培养的研究模型
1.3.2 毛囊体外培养的研究现状
1.4 毛乳头细胞分离培养及鉴定
1.4.1 毛乳头细胞分离培养
1.4.2 毛乳头细胞鉴定方法
1.5 小RNA研究概述
1.5.1 miRNA生物合成
1.5.2 miRNA生物学功能
1.5.3 miRNA在动物毛囊发育中的研究现状
1.6 维生素B6 的生物学作用及在动物生产上研究进展
1.6.1 维生素B6 的生物学作用
1.6.2 维生素B6 在动物生产上研究进展
1.7 课题目的意义
2 材料与方法
2.1 试验设计
2.1.1 獭兔皮肤毛乳头细胞分离培养与鉴定
2.1.2 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞差异miRNA筛选
2.1.3 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
2.1.4 ocu-miR-205 对獭兔皮肤组织影响的研究
2.1.5 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
2.1.6 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长影响的研究
2.1.7 维生素B6 对獭兔生产性能及毛囊发育影响的研究
2.2 试验材料
2.2.1 主要试剂耗材
2.2.2 主要仪器参数
2.2.3 主要数据库及分析软件
2.2.4 荧光定量PCR引物序列
2.3 试验方法
2.3.1 獭兔毛乳头细胞分离培养鉴定方法
2.3.2 小RNA文库构建及测序分析方法
2.3.3 ocu-miR-205 过表达及干扰表达腺病毒载体构建生产及转染方法
2.3.4 獭兔毛乳头细胞的细胞增殖、周期和凋亡的测定方法
2.3.5 獭兔触须毛囊分离培养方法
2.3.6 獭兔生产性能指标测定方法
2.3.7 獭兔皮肤毛囊密度测定方法
2.3.8 獭兔毛囊发育基因及miRNA表达量测定方法
2.3.9 獭兔毛囊发育蛋白表达量测定方法
2.4 数据处理与统计
3 结果与分析
3.1 獭兔皮肤毛乳头细胞分离培养及鉴定
3.1.1 形态学观察
3.1.2 姬姆萨染色
3.1.3 特异标记物表达
3.1.4 毛乳头细胞生长曲线绘制
3.1.5 不同代次毛乳头细胞增殖特性变化
3.1.6 不同代次毛乳头细胞周期性变化
3.1.7 毛乳头细胞冻存及复苏能力
3.2 不同被毛密度獭兔皮肤毛囊密度统计及毛乳头细胞RNA质量检测
3.2.1 不同被毛密度獭兔皮肤毛囊密度统计结果
3.2.2 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞RNA质量检测结果
3.3 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞小RNA测序结果
3.3.1 测序数据过滤
3.3.2 小RNA分类注释
3.3.3 小RNA表达分析
3.3.4 差异表达小RNA筛选
3.3.5 差异表达miRNA层次聚类
3.3.6 miRNA靶基因预测
3.3.7 差异表达miRNA靶基因富集分析
3.4 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞ocu-miR-205 测序结果
3.4.1 ocu-miR-205 序列及结构信息
3.4.2 ocu-miR-205 在不同被毛密度獭兔毛乳头细胞中的表达
3.4.3 ocu-miR-205-5p在獭兔不同组织中的表达
3.5 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
3.5.1 ocu-miR-205 转染獭兔毛乳头细胞效果观察
3.5.2 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖的影响
3.5.3 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞周期的影响
3.5.4 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞凋亡的影响
3.5.5 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞周期及凋亡基因表达的影响
3.5.6 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因表达的影响
3.5.7 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.6 ocu-miR-205 对獭兔皮肤组织影响的研究
3.6.1 ocu-miR-205 转染獭兔皮肤组织效果观察
3.6.2 ocu-miR-205 对獭兔皮肤毛囊发育相关基因表达的影响
3.6.3 ocu-miR-205 对獭兔皮肤毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.6.4 ocu-miR-205 对獭兔毛囊密度的影响
3.7 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
3.7.1 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖的影响
3.7.2 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞周期的影响
3.7.3 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞凋亡的影响
3.7.4 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖及凋亡基因表达的影响
3.7.5 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞ocu-miR-205-5p表达的影响
3.7.6 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因表达的影响
3.7.7 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.8 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长的影响
3.9 维生素B6 对獭兔生产性能及毛囊发育的影响
3.9.1 维生素B6 对獭兔生长性能的影响
3.9.2 维生素B6 对獭兔屠宰性能的影响
3.9.3 维生素B6 对獭兔皮张质量的影响
3.9.4 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊密度的影响
3.9.5 维生素B6 对獭兔皮肤ocu-miR-205-5p表达的影响
3.9.6 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊发育相关基因表达的影响
3.9.7 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊发育相关蛋白表达的影响
4 讨论
4.1 毛乳头细胞分离培养及形态特征
4.1.1 毛乳头细胞分离培养
4.1.2 毛乳头细胞形态特征
4.2 miRNA通过信号通路参与毛囊发育的分子机制
4.2.1 miRNA通过Wnt信号通路参与毛囊发育
4.2.2 miRNA通过Notch信号通路参与毛囊发育
4.2.3 miRNA通过BMP信号通路参与毛囊发育
4.3 miRNA通过细胞因子参与毛囊发育的分子机制
4.4 miR-205 参与动物毛囊发育的分子机制
4.5 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长的影响分析
4.6 维生素B6 对獭兔生产性能影响机制的分析
4.6.1 维生素B6 对獭兔生长性能影响机制的分析
4.6.2 维生素B6 对獭兔屠宰性能影响机制的分析
4.6.3 维生素B6 对獭兔皮张质量影响机制的分析
4.6.4 维生素B6 对獭兔被毛密度影响机制的分析
5 结论
6 参考文献
7 附录
8 致谢
基金资助
9 攻读博士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]长毛兔毛乳头细胞的分离培养及生长特性研究[J]. 白莉雅,孙海涛,呼红梅,杨丽萍,高淑霞,姜文学. 家畜生态学报. 2017(10)
[2]不同代次人胎盘间充质干细胞的生物活性比较研究[J]. 章毅,许惠利,王锋,王哲,李春丽,陈亮. 中国医药生物技术. 2016(05)
[3]维生素B6与畜禽蛋白质代谢[J]. 党晓鹏. 江西饲料. 2016(01)
[4]饲粮维生素B6添加水平对3～5月龄生长獭兔消化代谢和抗氧化性能的影响[J]. 刘公言,孙超然,尚随民,吴振宇,王春阳,李福昌. 动物营养学报. 2015(11)
[5]饲粮泛酸添加水平对3～5月龄獭兔生产性能和抗氧化功能的影响[J]. 赵楠,刘公言,刘磊,朱岩丽,李福昌. 动物营养学报. 2015(08)
[6]饲粮维生素B6添加水平对生长獭兔生长性能及维生素B6代谢的影响[J]. 刘公言,赵楠,朱岩丽,刘磊,梁才芝,李福昌. 动物营养学报. 2015(07)
[7]饲粮核黄素添加水平对生长獭兔生长性能、毛皮质量、血液指标及抗氧化功能的影响[J]. 郑琛,李春燕,隋啸一,赵楠,刘公言,李福昌. 动物营养学报. 2015(03)
[8]饲粮烟酸添加水平对生长獭兔生长性能、毛皮品质、血脂代谢及血清抗氧化指标的影响[J]. 李春燕,郑琛,隋啸一,赵楠,刘公言,李福昌. 动物营养学报. 2015(03)
[9]不同被毛密度獭兔皮肤差异表达基因的研究[J]. 李冰,李福昌,朱岩丽,王雪鹏,王春阳. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[10]miR-let7a及其靶基因IGF-1R在绒山羊毛囊发育周期中的表达[J]. 江倩,李建平,曲海娥,姜怀志,张巧灵. 中国兽医学报. 2014(10)
博士论文
[1]藏绵羊毛囊不同发育时期miRNAs表达变化研究[D]. 唐晓惠.华中农业大学 2012
[2]大黄鱼、鲈鱼主要B族维生素和矿物质—磷的营养生理研究[D]. 张春晓.中国海洋大学 2006
硕士论文
[1]FGF10和Spry4基因的克隆及其在绵羊皮肤中的表达[D]. 袁枫.新疆农业大学 2015
[2]MiR-125b在细毛羊与绒山羊皮肤组织中差异表达及其靶基因的筛选与鉴定[D]. 曲海娥.吉林大学 2014
[3]维生素C和B6对皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）代谢反应和贝壳生物矿化影响的研究[D]. 冯秀妮.中国海洋大学 2005
[4]内蒙古白绒山羊皮肤毛囊活性的变化规律及生长激素受体在毛囊中的定位研究[D]. 张焱如.内蒙古农业大学 2001
本文编号：3638004
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：169 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 獭兔生产现状及皮张质量评定
1.1.1 獭兔生产现状
1.1.2 獭兔皮张质量评定
1.2 毛乳头细胞在毛囊发育中作用
1.2.1 皮肤毛囊结构及功能
1.2.2 毛乳头细胞与毛囊发育
1.2.3 毛乳头细胞与毛囊周期性生长
1.3 毛囊体外培养的研究模型及研究现状
1.3.1 毛囊体外培养的研究模型
1.3.2 毛囊体外培养的研究现状
1.4 毛乳头细胞分离培养及鉴定
1.4.1 毛乳头细胞分离培养
1.4.2 毛乳头细胞鉴定方法
1.5 小RNA研究概述
1.5.1 miRNA生物合成
1.5.2 miRNA生物学功能
1.5.3 miRNA在动物毛囊发育中的研究现状
1.6 维生素B6 的生物学作用及在动物生产上研究进展
1.6.1 维生素B6 的生物学作用
1.6.2 维生素B6 在动物生产上研究进展
1.7 课题目的意义
2 材料与方法
2.1 试验设计
2.1.1 獭兔皮肤毛乳头细胞分离培养与鉴定
2.1.2 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞差异miRNA筛选
2.1.3 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
2.1.4 ocu-miR-205 对獭兔皮肤组织影响的研究
2.1.5 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
2.1.6 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长影响的研究
2.1.7 维生素B6 对獭兔生产性能及毛囊发育影响的研究
2.2 试验材料
2.2.1 主要试剂耗材
2.2.2 主要仪器参数
2.2.3 主要数据库及分析软件
2.2.4 荧光定量PCR引物序列
2.3 试验方法
2.3.1 獭兔毛乳头细胞分离培养鉴定方法
2.3.2 小RNA文库构建及测序分析方法
2.3.3 ocu-miR-205 过表达及干扰表达腺病毒载体构建生产及转染方法
2.3.4 獭兔毛乳头细胞的细胞增殖、周期和凋亡的测定方法
2.3.5 獭兔触须毛囊分离培养方法
2.3.6 獭兔生产性能指标测定方法
2.3.7 獭兔皮肤毛囊密度测定方法
2.3.8 獭兔毛囊发育基因及miRNA表达量测定方法
2.3.9 獭兔毛囊发育蛋白表达量测定方法
2.4 数据处理与统计
3 结果与分析
3.1 獭兔皮肤毛乳头细胞分离培养及鉴定
3.1.1 形态学观察
3.1.2 姬姆萨染色
3.1.3 特异标记物表达
3.1.4 毛乳头细胞生长曲线绘制
3.1.5 不同代次毛乳头细胞增殖特性变化
3.1.6 不同代次毛乳头细胞周期性变化
3.1.7 毛乳头细胞冻存及复苏能力
3.2 不同被毛密度獭兔皮肤毛囊密度统计及毛乳头细胞RNA质量检测
3.2.1 不同被毛密度獭兔皮肤毛囊密度统计结果
3.2.2 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞RNA质量检测结果
3.3 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞小RNA测序结果
3.3.1 测序数据过滤
3.3.2 小RNA分类注释
3.3.3 小RNA表达分析
3.3.4 差异表达小RNA筛选
3.3.5 差异表达miRNA层次聚类
3.3.6 miRNA靶基因预测
3.3.7 差异表达miRNA靶基因富集分析
3.4 不同被毛密度獭兔毛乳头细胞ocu-miR-205 测序结果
3.4.1 ocu-miR-205 序列及结构信息
3.4.2 ocu-miR-205 在不同被毛密度獭兔毛乳头细胞中的表达
3.4.3 ocu-miR-205-5p在獭兔不同组织中的表达
3.5 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
3.5.1 ocu-miR-205 转染獭兔毛乳头细胞效果观察
3.5.2 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖的影响
3.5.3 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞周期的影响
3.5.4 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞凋亡的影响
3.5.5 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞细胞周期及凋亡基因表达的影响
3.5.6 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因表达的影响
3.5.7 ocu-miR-205 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.6 ocu-miR-205 对獭兔皮肤组织影响的研究
3.6.1 ocu-miR-205 转染獭兔皮肤组织效果观察
3.6.2 ocu-miR-205 对獭兔皮肤毛囊发育相关基因表达的影响
3.6.3 ocu-miR-205 对獭兔皮肤毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.6.4 ocu-miR-205 对獭兔毛囊密度的影响
3.7 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞影响的研究
3.7.1 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖的影响
3.7.2 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞周期的影响
3.7.3 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞凋亡的影响
3.7.4 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞细胞增殖及凋亡基因表达的影响
3.7.5 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞ocu-miR-205-5p表达的影响
3.7.6 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因表达的影响
3.7.7 维生素B6 对獭兔毛乳头细胞毛囊发育相关蛋白表达的影响
3.8 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长的影响
3.9 维生素B6 对獭兔生产性能及毛囊发育的影响
3.9.1 维生素B6 对獭兔生长性能的影响
3.9.2 维生素B6 对獭兔屠宰性能的影响
3.9.3 维生素B6 对獭兔皮张质量的影响
3.9.4 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊密度的影响
3.9.5 维生素B6 对獭兔皮肤ocu-miR-205-5p表达的影响
3.9.6 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊发育相关基因表达的影响
3.9.7 维生素B6 对獭兔皮肤毛囊发育相关蛋白表达的影响
4 讨论
4.1 毛乳头细胞分离培养及形态特征
4.1.1 毛乳头细胞分离培养
4.1.2 毛乳头细胞形态特征
4.2 miRNA通过信号通路参与毛囊发育的分子机制
4.2.1 miRNA通过Wnt信号通路参与毛囊发育
4.2.2 miRNA通过Notch信号通路参与毛囊发育
4.2.3 miRNA通过BMP信号通路参与毛囊发育
4.3 miRNA通过细胞因子参与毛囊发育的分子机制
4.4 miR-205 参与动物毛囊发育的分子机制
4.5 维生素B6 对獭兔毛囊毛干生长的影响分析
4.6 维生素B6 对獭兔生产性能影响机制的分析
4.6.1 维生素B6 对獭兔生长性能影响机制的分析
4.6.2 维生素B6 对獭兔屠宰性能影响机制的分析
4.6.3 维生素B6 对獭兔皮张质量影响机制的分析
4.6.4 维生素B6 对獭兔被毛密度影响机制的分析
5 结论
6 参考文献
7 附录
8 致谢
基金资助
9 攻读博士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]长毛兔毛乳头细胞的分离培养及生长特性研究[J]. 白莉雅,孙海涛,呼红梅,杨丽萍,高淑霞,姜文学. 家畜生态学报. 2017(10)
[2]不同代次人胎盘间充质干细胞的生物活性比较研究[J]. 章毅,许惠利,王锋,王哲,李春丽,陈亮. 中国医药生物技术. 2016(05)
[3]维生素B6与畜禽蛋白质代谢[J]. 党晓鹏. 江西饲料. 2016(01)
[4]饲粮维生素B6添加水平对3～5月龄生长獭兔消化代谢和抗氧化性能的影响[J]. 刘公言,孙超然,尚随民,吴振宇,王春阳,李福昌. 动物营养学报. 2015(11)
[5]饲粮泛酸添加水平对3～5月龄獭兔生产性能和抗氧化功能的影响[J]. 赵楠,刘公言,刘磊,朱岩丽,李福昌. 动物营养学报. 2015(08)
[6]饲粮维生素B6添加水平对生长獭兔生长性能及维生素B6代谢的影响[J]. 刘公言,赵楠,朱岩丽,刘磊,梁才芝,李福昌. 动物营养学报. 2015(07)
[7]饲粮核黄素添加水平对生长獭兔生长性能、毛皮质量、血液指标及抗氧化功能的影响[J]. 郑琛,李春燕,隋啸一,赵楠,刘公言,李福昌. 动物营养学报. 2015(03)
[8]饲粮烟酸添加水平对生长獭兔生长性能、毛皮品质、血脂代谢及血清抗氧化指标的影响[J]. 李春燕,郑琛,隋啸一,赵楠,刘公言,李福昌. 动物营养学报. 2015(03)
[9]不同被毛密度獭兔皮肤差异表达基因的研究[J]. 李冰,李福昌,朱岩丽,王雪鹏,王春阳. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[10]miR-let7a及其靶基因IGF-1R在绒山羊毛囊发育周期中的表达[J]. 江倩,李建平,曲海娥,姜怀志,张巧灵. 中国兽医学报. 2014(10)
博士论文
[1]藏绵羊毛囊不同发育时期miRNAs表达变化研究[D]. 唐晓惠.华中农业大学 2012
[2]大黄鱼、鲈鱼主要B族维生素和矿物质—磷的营养生理研究[D]. 张春晓.中国海洋大学 2006
硕士论文
[1]FGF10和Spry4基因的克隆及其在绵羊皮肤中的表达[D]. 袁枫.新疆农业大学 2015
[2]MiR-125b在细毛羊与绒山羊皮肤组织中差异表达及其靶基因的筛选与鉴定[D]. 曲海娥.吉林大学 2014
[3]维生素C和B6对皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）代谢反应和贝壳生物矿化影响的研究[D]. 冯秀妮.中国海洋大学 2005
[4]内蒙古白绒山羊皮肤毛囊活性的变化规律及生长激素受体在毛囊中的定位研究[D]. 张焱如.内蒙古农业大学 2001
本文编号：3638004
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