大肠杆菌感染过程中TLR2/4和NLRP3介导小鼠炎症反应发生的机制研究

发布时间：2022-12-22 02:06

　　大肠埃希氏菌（Escherichia coli,E.coli）是一种革兰氏阴性细菌,是人和其他哺乳动物正常肠道菌群的重要组成部分,同时也是一个高度多样化甚至会导致死亡的病原菌,能够引起一系列疾病。模式识别受体（pattern recognition receptor,PRRs）包括 TOLL 样受体（Toll-like receptor,TLRs）和 NODE 样受体（Node-like receptor,NLRs）,在宿主对抗入侵病原体的早期应答中识别特定的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular pattern,PAMPs）或损伤相关分子模式（Damage-associated molecular pattern,DAMPs）。革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）能够激活巨噬细胞以及树突状细胞等免疫细胞的TLR4引起宿主炎症反应。大量证据表明TLR2作为一种PRR在介导多个微生物感染性疾病的发展过程中发挥广泛的病理性作用。TLR2和TLR4在宿主对大肠杆菌感染的应答中均发挥重要作用。NLRP3炎性小体是目前... 

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 大肠埃希氏菌概述
        1.1.1 大肠埃希氏菌的附着力
        1.1.2 大肠埃希氏菌分泌毒素
    1.2 天然免疫识别与免疫调控的分子机制研究进展
    1.3 Toll样受体家族
        1.3.1 TLR的结构
        1.3.2 哺乳动物TLR的配体
        1.3.3 TLR的信号转导
        1.3.4 TLRs在疾病中的作用
        1.3.5 TLRs的展望和未来前景
    1.4 NOD样受体
        1.4.1 NLRP3炎性小体的生物学效应
        1.4.2 NLRP3炎性小体的启动
        1.4.3 翻译后的NLRP3修饰
        1.4.4 NLRP3炎性小体的激活
        1.4.5 NLRP3活化的守恒元素
        1.4.6 以NLRP3为靶标的药物研究
        1.4.7 NLRP3激动剂用于疫苗和癌症
        1.4.8 NLRs的展望和未来前景
    1.5 本研究的目的与意义
2 TLR2、TLR4和NLRP3在小鼠腹腔巨噬细胞感染大肠杆菌过程中的作用研究
    2.1 材料
        2.1.1 实验菌株
        2.1.2 实验药物
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 试剂与耗材
        2.1.5 仪器设备
        2.1.6 溶液配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 菌种复苏与洗涤
        2.2.2 BLP的提纯
        2.2.3 小鼠原代腹腔巨噬细胞的培养
        2.2.4 LPS、、BLP、E. coli DH5α及E. coli JE5505刺激WT、 TLR2~(-/-)和TLR4~(-/-)巨噬细胞后NLRP3的表达
        2.2.5 TLR2、TLR4和NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响的研究
        2.2.6 TLR2、TLR4和NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠巨噬细胞MAPK、NF-κ B及caspase-1信号通路激活的影响的研究
        2.2.7 TLR2、TLR4、NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠巨噬细胞COX-2表达的影响研究
        2.2.8 NLRP3对巨噬细胞吞噬大肠杆菌作用的影响
        2.2.9 数据统计
    2.3 结果
        2.3.1 细菌毒素和大肠杆菌感染对小鼠腹腔巨噬细胞中NLRP3表达的影响
        2.3.2 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠腹腔巨噬细胞中相关因子表达的影响
        2.3.3 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠腹腔巨噬细胞中MAPK和NF-κ B信号通路的影响
        2.3.4 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠腹腔巨噬细胞中caspase-1信号通路激活的影响
        2.3.5 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠腹腔巨噬细胞中COX-2的表达的影响
        2.3.6 NLRP3对小鼠腹腔巨噬细胞杀伤E.coli过程的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 TLR2、TLR4和NLRP3在小鼠感染大肠杆菌过程中作用的研究
    3.1 材料
        3.1.1 实验菌株
        3.1.2 实验药物
        3.1.3 实验动物
        3.1.4 实验试剂和耗材
        3.1.5 仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 菌种复苏与洗涤
        3.2.2 BLP的提纯
        3.2.3 TLR2、TLR4和NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠血清中细胞因子表达的影响的研究
        3.2.4 TLR2、TLR4和NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠肝脏组织中HMGB1基因表达的影响研究
        3.2.5 免疫荧光法检测TLR2、TLR4和NLRP3对大肠杆菌感染的小鼠肝脏组织中HMGB1蛋白表达的影响研究
        3.2.6 检测AST和ALT在大肠杆菌感染的小鼠血清中的含量
        3.2.7 检测大肠杆菌感染的小鼠肝脏组织损伤程度
    3.3 结果
        3.3.1 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠血清中相关因子表达的影响
        3.3.2 TLR2、TLR4和NLRP3对炎性刺激小鼠肝脏中HMGB1的表达的影响
        3.3.3 TLR2、TLR4和NLRP3对E. coli感染小鼠肝脏损伤过程的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 全文讨论
5 结论
6 本课题主要创新之处
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3723225