甘草查耳酮A对急性肝损伤的保护作用及其机制的研究
发布时间：2023-03-29 22:07
肝脏是人类与动物最重要的器官之一,它担任着代谢与解毒两大最主要的功能,但它也是极容易遭受损伤的一种器官。急性肝损伤,又名急性肝功能衰竭(Acute liver failure,ALF)是多种因素(如:肝炎病毒、药物毒性、食物发霉或酒精等)引起的一种严重的肝损伤疾病并伴有预后不良和较高的死亡率。同时,炎症和氧化应激对多种疾病的发生与发展过程,发挥着至关重要的作用。最近研究表明,核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)作为重要的核转录因子,它的激活能够有效调节氧化应激和炎症反应,已被广泛认为是一种治疗肝疾病的潜在靶标。重要的是,天然化合物作为Nrf2激活剂的一个重要的来源之一,它可上调Nrf2信号从而减缓多种疾病的进展。甘草查尔酮A(Licochalcone A,Lico A)是甘草中的一种黄酮类化合物,它具有多种生物学活性,包括抗炎和抗氧化作用。因此,探究Lico A上调Nrf2信号通路,进而对急性肝损伤具有良好的保护作用及其机制,是十分重要的。本研究首先利用多种刺激物...
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
引言
第一篇 文献综述
第1章 急性肝损伤的研究进展
1.1 急性肝损伤概论
1.2 ALF发生病因
1.2.1 病毒与ALF
1.2.2 药物毒性与ALF
1.2.3 食物发霉与ALF
1.3 ALF发生机制
1.3.1 氧化应激与ALF
1.3.2 炎症反应与ALF
1.3.3 自噬与ALF
1.4 多重信号传导与ALF
1.4.1 TLR4-MAPK/NF-κB信号通路与ALF
1.4.2 NLRP3炎性小体与ALF
1.4.3 Txnip蛋白
1.4.4 Nrf2信号通路
1.5 ALF模型
1.5.1 对乙酰氨基酚(APAP)
1.5.2 LPS/GalN
第2章 Nrf2信号通路在疾病中研究进展
2.1 Nrf2信号通路的组成与功能
2.2 Keap1-Nrf2/ARE的信号传导
2.2.1 Nrf2信号激活
2.2.2 Nrf2调控的下游基因的表达
2.3 Nrf2通路与多种病理过程密切相关
2.3.1 Nrf2通路与氧化应激相关
2.3.2 Nrf2通路与炎症相关
2.3.3 Nrf2通路与自噬相关
2.4 Nrf2通路参与多种疾病的发生
2.4.1 Nrf2信号通路在神经性疾病中的作用
2.4.2 Nrf2信号通路在糖尿病和心脏病中的作用
2.4.3 Nrf2信号通路在肺疾病中的作用
2.4.4 Nrf2信号通路在肝疾病中的作用
2.5 天然小分子化合物激活Nrf2信号通路在多种疾病中的作用
第3章 甘草查尔酮A的药理学研究进展
3.1 中药甘草
3.1.1 甘草的中医理论
3.1.2 甘草治疗急性肝损伤的研究进展
3.2 甘草查尔酮A的来源
3.3 甘草查尔酮A的化学结构及理化性质
3.4 甘草查尔酮A现代药理学研究概况
3.4.1 抗肿瘤作用
3.4.2 抗菌作用
3.4.3 抗寄生虫作用
3.4.4 抗病毒作用
3.4.5 抗炎作用
3.4.6 抗氧化作用
3.4.7 其他作用
3.5 小结
第二篇 实验部分
第1章 Lico A缓解多种刺激物对肝细胞毒性作用
1.1 材料
1.1.1 实验细胞
1.1.2 仪器
1.1.3 药品和试剂
1.1.4 实验所需试剂的配制
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 MTT法测定细胞活性
1.2.3 细胞内ROS水平的检测
1.2.4 数据统计与分析
1.3 结果
1.3.1 Lico A缓解t-BHP诱导的HepG2细胞毒性
1.3.2 Lico A减轻AFB1 诱导的HepG2细胞毒性
1.3.3 Lico A改善LPS/H2O2 诱导的HepG2细胞毒性
1.3.4 Lico A降低APAP诱导的HepG2细胞毒性
1.3.5 Lico A减少多种刺激物诱导的HepG2细胞中ROS过多累积
1.4 讨论
1.5 小结
第2章 Lico A缓解t-BHP诱导的肝细胞毒性的作用机制
2.1 材料
2.1.1 实验细胞
2.1.2 仪器
2.1.3 药品和试剂
2.1.4 实验所需试剂的配制
2.2 方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 CRISPR/Cas9技术敲除Nrf2细胞系构建
2.2.3 MTT法测定细胞活性
2.2.4 Hoechst33342/PI双荧光染色法测定细胞凋亡
2.2.5 细胞内ROS水平的检测
2.2.6 JC-1 染色测定线粒体膜电位(MMP)
2.2.7 ARE荧光检测
2.2.8 Western blotting法检测目的蛋白的表达
2.2.9 数据统计与分析
2.3 结果
2.3.1 Lico A缓解t-BHP诱导的HepG2细胞毒性
2.3.2 Lico A减少t-BHP诱导的ROS过多产生
2.3.3 Lico A改善t-BHP诱导的HepG2细胞线粒体损伤
2.3.4 Lico A调控抗氧化蛋白HO-1,NQO1,GCLC与GCLM的表达
2.3.5 Lico A激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化信号通路
2.3.6 Lico A上调Nrf2信号对抗氧化蛋白和t-BHP诱导的细胞毒性的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 Lico A缓解APAP诱导的ALF作用及机制
3.1 材料
3.1.1 仪器
3.1.2 药品和试剂
3.2 方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 构建APAP诱导的ALF模型
3.2.3 血清中AST和ALT水平的检测
3.2.4 肝脏组织病理学检查
3.2.5 MPO、SOD、GSH以及GSSG含量测定
3.2.6 肝脏蛋白提取及Western blotting检测
3.2.7 数据统计与分析
3.3 结果
3.3.1 Lico A降低APAP诱导的小鼠死亡率及ALT/AST水平
3.3.2 Lico A改善APAP诱导的小鼠肝组织损伤
3.3.3 Lico A抑制APAP诱导的小鼠肝组织氧化损伤
3.3.4 Lico A减轻APAP诱导的小鼠肝线粒体损伤
3.3.5 Lico A抑制APAP诱导的小鼠肝细胞凋亡
3.3.6 Lico A调控多种抗氧化蛋白的表达
3.3.7 Lico A上调Keap1-Nrf2抗氧化信号通路
3.3.8 Lico A改善APAP诱导的ALF靶向于Nrf2的调控
3.3.9 Lico A抑制的APAP诱导的线粒体损伤靶向于Nrf
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 Lico A缓解LPS/GalN诱导的ALF作用及机制
4.1 材料
4.1.1 仪器
4.1.2 药品和试剂
4.2 方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 构建APAP诱导的ALF模型
4.2.3 血清中TNF-α、IL-6和IL-1β 的测定
4.2.4 肝脏组织病理学检查
4.2.5 生化指标的检测方法
4.2.6 肝脏蛋白提取及Western blotting检测
4.2.7 数据统计与分析
4.3 结果
4.3.1 Lico A降低LPS/GalN诱导的ALF小鼠死亡率及ALT/AST水平
4.3.2 Lico A改善LPS/GalN诱导的ALF小鼠肝组织损伤
4.3.3 Lico A抑制LPS/GalN诱导的ALF小鼠炎性因子分泌
4.3.4 Lico A减轻LPS/GalN诱导的ALF小鼠氧化损伤
4.3.5 Lico A抑制LPS/GalN激活的TLR4 信号
4.3.6 Lico A阻止LPS/GalN诱导的MAPK信号通路的激活
4.3.7 Lico A抑制LPS/GalN诱导的NF-κB信号通路的激活
4.3.8 Lico A抑制LPS/GalN诱导的Txnip/Trx-1-NLRP3 炎性小体的激活
4.3.9 Lico A在LPS/GalN诱导的ALF小鼠中上调Nrf2/HO-1信号通路
4.3.10 Lico A降低LPS/GalN诱导的小鼠死亡非依赖于Nrf2 信号通路
4.3.11 Lico A提高LPS/GalN诱导的ALF小鼠中自噬蛋白的表达
4.3.12 Lico A上调LPS/GalN诱导的ALF小鼠中AMPK/TFEB信号
4.3.13 Nrf2缺失增强Lico A诱导的自噬激活的作用
4.3.14 Lico A缓解LPS/GalN诱导的ALF可能是靶向于自噬激活
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
致谢
本文编号：3774581
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
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中文摘要
abstract
引言
第一篇 文献综述
第1章 急性肝损伤的研究进展
1.1 急性肝损伤概论
1.2 ALF发生病因
1.2.1 病毒与ALF
1.2.2 药物毒性与ALF
1.2.3 食物发霉与ALF
1.3 ALF发生机制
1.3.1 氧化应激与ALF
1.3.2 炎症反应与ALF
1.3.3 自噬与ALF
1.4 多重信号传导与ALF
1.4.1 TLR4-MAPK/NF-κB信号通路与ALF
1.4.2 NLRP3炎性小体与ALF
1.4.3 Txnip蛋白
1.4.4 Nrf2信号通路
1.5 ALF模型
1.5.1 对乙酰氨基酚(APAP)
1.5.2 LPS/GalN
第2章 Nrf2信号通路在疾病中研究进展
2.1 Nrf2信号通路的组成与功能
2.2 Keap1-Nrf2/ARE的信号传导
2.2.1 Nrf2信号激活
2.2.2 Nrf2调控的下游基因的表达
2.3 Nrf2通路与多种病理过程密切相关
2.3.1 Nrf2通路与氧化应激相关
2.3.2 Nrf2通路与炎症相关
2.3.3 Nrf2通路与自噬相关
2.4 Nrf2通路参与多种疾病的发生
2.4.1 Nrf2信号通路在神经性疾病中的作用
2.4.2 Nrf2信号通路在糖尿病和心脏病中的作用
2.4.3 Nrf2信号通路在肺疾病中的作用
2.4.4 Nrf2信号通路在肝疾病中的作用
2.5 天然小分子化合物激活Nrf2信号通路在多种疾病中的作用
第3章 甘草查尔酮A的药理学研究进展
3.1 中药甘草
3.1.1 甘草的中医理论
3.1.2 甘草治疗急性肝损伤的研究进展
3.2 甘草查尔酮A的来源
3.3 甘草查尔酮A的化学结构及理化性质
3.4 甘草查尔酮A现代药理学研究概况
3.4.1 抗肿瘤作用
3.4.2 抗菌作用
3.4.3 抗寄生虫作用
3.4.4 抗病毒作用
3.4.5 抗炎作用
3.4.6 抗氧化作用
3.4.7 其他作用
3.5 小结
第二篇 实验部分
第1章 Lico A缓解多种刺激物对肝细胞毒性作用
1.1 材料
1.1.1 实验细胞
1.1.2 仪器
1.1.3 药品和试剂
1.1.4 实验所需试剂的配制
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 MTT法测定细胞活性
1.2.3 细胞内ROS水平的检测
1.2.4 数据统计与分析
1.3 结果
1.3.1 Lico A缓解t-BHP诱导的HepG2细胞毒性
1.3.2 Lico A减轻AFB1 诱导的HepG2细胞毒性
1.3.3 Lico A改善LPS/H2O2 诱导的HepG2细胞毒性
1.3.4 Lico A降低APAP诱导的HepG2细胞毒性
1.3.5 Lico A减少多种刺激物诱导的HepG2细胞中ROS过多累积
1.4 讨论
1.5 小结
第2章 Lico A缓解t-BHP诱导的肝细胞毒性的作用机制
2.1 材料
2.1.1 实验细胞
2.1.2 仪器
2.1.3 药品和试剂
2.1.4 实验所需试剂的配制
2.2 方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 CRISPR/Cas9技术敲除Nrf2细胞系构建
2.2.3 MTT法测定细胞活性
2.2.4 Hoechst33342/PI双荧光染色法测定细胞凋亡
2.2.5 细胞内ROS水平的检测
2.2.6 JC-1 染色测定线粒体膜电位(MMP)
2.2.7 ARE荧光检测
2.2.8 Western blotting法检测目的蛋白的表达
2.2.9 数据统计与分析
2.3 结果
2.3.1 Lico A缓解t-BHP诱导的HepG2细胞毒性
2.3.2 Lico A减少t-BHP诱导的ROS过多产生
2.3.3 Lico A改善t-BHP诱导的HepG2细胞线粒体损伤
2.3.4 Lico A调控抗氧化蛋白HO-1,NQO1,GCLC与GCLM的表达
2.3.5 Lico A激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化信号通路
2.3.6 Lico A上调Nrf2信号对抗氧化蛋白和t-BHP诱导的细胞毒性的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 Lico A缓解APAP诱导的ALF作用及机制
3.1 材料
3.1.1 仪器
3.1.2 药品和试剂
3.2 方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 构建APAP诱导的ALF模型
3.2.3 血清中AST和ALT水平的检测
3.2.4 肝脏组织病理学检查
3.2.5 MPO、SOD、GSH以及GSSG含量测定
3.2.6 肝脏蛋白提取及Western blotting检测
3.2.7 数据统计与分析
3.3 结果
3.3.1 Lico A降低APAP诱导的小鼠死亡率及ALT/AST水平
3.3.2 Lico A改善APAP诱导的小鼠肝组织损伤
3.3.3 Lico A抑制APAP诱导的小鼠肝组织氧化损伤
3.3.4 Lico A减轻APAP诱导的小鼠肝线粒体损伤
3.3.5 Lico A抑制APAP诱导的小鼠肝细胞凋亡
3.3.6 Lico A调控多种抗氧化蛋白的表达
3.3.7 Lico A上调Keap1-Nrf2抗氧化信号通路
3.3.8 Lico A改善APAP诱导的ALF靶向于Nrf2的调控
3.3.9 Lico A抑制的APAP诱导的线粒体损伤靶向于Nrf
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 Lico A缓解LPS/GalN诱导的ALF作用及机制
4.1 材料
4.1.1 仪器
4.1.2 药品和试剂
4.2 方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 构建APAP诱导的ALF模型
4.2.3 血清中TNF-α、IL-6和IL-1β 的测定
4.2.4 肝脏组织病理学检查
4.2.5 生化指标的检测方法
4.2.6 肝脏蛋白提取及Western blotting检测
4.2.7 数据统计与分析
4.3 结果
4.3.1 Lico A降低LPS/GalN诱导的ALF小鼠死亡率及ALT/AST水平
4.3.2 Lico A改善LPS/GalN诱导的ALF小鼠肝组织损伤
4.3.3 Lico A抑制LPS/GalN诱导的ALF小鼠炎性因子分泌
4.3.4 Lico A减轻LPS/GalN诱导的ALF小鼠氧化损伤
4.3.5 Lico A抑制LPS/GalN激活的TLR4 信号
4.3.6 Lico A阻止LPS/GalN诱导的MAPK信号通路的激活
4.3.7 Lico A抑制LPS/GalN诱导的NF-κB信号通路的激活
4.3.8 Lico A抑制LPS/GalN诱导的Txnip/Trx-1-NLRP3 炎性小体的激活
4.3.9 Lico A在LPS/GalN诱导的ALF小鼠中上调Nrf2/HO-1信号通路
4.3.10 Lico A降低LPS/GalN诱导的小鼠死亡非依赖于Nrf2 信号通路
4.3.11 Lico A提高LPS/GalN诱导的ALF小鼠中自噬蛋白的表达
4.3.12 Lico A上调LPS/GalN诱导的ALF小鼠中AMPK/TFEB信号
4.3.13 Nrf2缺失增强Lico A诱导的自噬激活的作用
4.3.14 Lico A缓解LPS/GalN诱导的ALF可能是靶向于自噬激活
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
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本文编号：3774581
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