Circ-9110吸附miR-100-5p调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究

发布时间：2023-10-17 17:45

　　胚胎附植对雌性家畜受孕起决定性的作用。胚胎附植成功的两个不可或缺的因素是胚胎的质量和容受性的子宫内膜,相关研究表明,超过60%的体外授精胚胎植入失败是由子宫内膜容受性异常引起的,胚胎植入失败会给动物生产造成重大的损失。本课题组前期研究表明,mi RNAs和circ RNAs可能调控奶山羊容受性子宫内膜的建立。然而,mi RNAs和circ RNAs在奶山羊容受性子宫内膜中的作用和分子调控机理还需深入研究。根据实验室前期建立的数据库,得到奶山羊容受前期(PE,D5)和容受期(RE,D15)子宫内膜组织中差异性表达的mi RNAs。由于ESCs在子宫内膜容受期主要发挥增殖的作用,本试验通过采用双荧光素酶基因报告系统、RNA干扰、过表达、免疫荧光等技术,研究circ RNA、mi RNA和m RNA在奶山羊胚胎植入期对子宫内膜基质细胞增殖的调控作用及分子调控机理,获得以下研究结果:1.miR-100-5p对ESCs增殖的调控作用mi R-100-5p在RE中的表达量与PE相比显著下调(p<0.05)。在体外,mi R-100-5p mimic处理48 h后,降低ESCs的活力,抑制ES...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
文献综述
    第一章 子宫内膜容受性的研究进展
        1.1 前言
        1.2 子宫内膜研究
        1.3 胚胎植入研究
        1.4 子宫内膜蜕膜化研究
        1.5 子宫内膜基质细胞研究
            1.5.1 子宫内膜基质细胞的功能
            1.5.2 ESCs干细胞研究
        1.6 ESCs的增殖和分化研究
            1.6.1 ESCs周期的激素调节
            1.6.2 ESC增殖和分化的重要控制因素
            1.6.3 参与ESC增殖和分化的转录因子
        1.7 miRNAs调控子宫内膜的研究进展
            1.7.1 成熟miRNAs的起源
            1.7.2 miRNAs的作用机制
            1.7.4 miRNAs在奶山羊子宫内膜中的研究进展
            1.7.5 miR-100的研究进展
        1.8 circ RNAs调控子宫内膜的研究进展
            1.8.1 真核生物中circ RNA的起源
            1.8.2 真核生物中circ RNAs的数量
            1.8.3 真核生物中circ RNAs的功能
            1.8.4 circ RNAs在动物生产中的研究进展
            1.8.5 circ RNAs在胚胎植入中的研究进展
        1.9 研究目的与意义
        1.10 试验思路与方法
试验研究
    第二章 miR-100-5p调控奶山羊ESCs增殖作用的研究
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 试验仪器
            2.2.2 材料试剂
            2.2.3 试验动物
            2.2.4 培养及鉴定奶山羊子宫内膜基质细胞(ESCs)
            2.2.5 qPCR过程
            2.2.6 细胞增殖分析
            2.2.7 细胞周期和细胞凋亡检测
            2.2.8 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)
            2.2.9 统计学分析
        2.3 结果
            2.3.1 奶山羊子宫内膜基质细胞(ESCs)的鉴定
            2.3.2 miR-100-5p在奶山羊子宫内膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表达
            2.3.3 miR-100-5p在 ESCs中的表达效率
            2.3.4 miR-100-5p对 ESCs活力的影响
            2.3.5 miR-100-5p对 ESCs增殖的影响
            2.3.6 miR-100-5p对 ESCs周期的影响
            2.3.7 miR-100-5p对 ESCs凋亡的影响
            2.3.8 miR-100-5p对 ESCs凋亡相关蛋白表达的影响
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 miR-100-5p通过靶基因HOXA1 调控ESCs增殖的作用研究
        3.1 引言
        3.2 材料与方法
            3.2.1 试验仪器
            3.2.2 材料试剂
            3.2.3 试验动物
            3.2.4 细胞培养
            3.2.5 RT-q PCR
            3.2.6 构建双荧光素酶报告载体
            3.2.7 HOXA1过表达载体构建
            3.2.8 细胞增殖检测
            3.2.9 细胞周期和细胞凋亡检测
            3.2.10 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)
            3.2.11 统计学分析
        3.3 结果
            3.3.1 miR-100-5p靶基因的鉴定
            3.3.2 奶山羊HOXA1基因的鉴定
            3.3.3 HOXA1在奶山羊容受期和容受前期子宫内膜中的差异表达
            3.3.4 HOXA1过表达和干扰效率检测
            3.3.5 HOXA1对ESCs活力的影响
            3.3.6 HOXA1对ESCs增殖的影响
            3.3.7 HOXA1对ESCs周期的影响
            3.3.8 HOXA1对ESCs凋亡的影响
            3.3.9 HOXA1对ESCs凋亡相关蛋白表达的影响
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 circ-9110 在奶山羊子宫内膜中的筛选及其对ESCs增殖的调控作用
        4.1 引言
        4.2 材料与方法
            4.2.1 试验仪器
            4.2.2 材料试剂
            4.2.3 试验动物
            4.2.4 细胞培养
            4.2.5 RT-q PCR
            4.2.6 双荧光素酶报告载体构建
            4.2.7 circ-9110过表达载体构建
            4.2.8 细胞增殖检测
            4.2.9 细胞周期和细胞凋亡检测
            4.2.10 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)
            4.2.11 统计学分析
        4.3 结果
            4.3.1 circ-9110的筛选
            4.3.2 circ-9110 作为竞争性内源RNA(ce RNA)结合miR-100-5p
            4.3.3 circ-9110 在奶山羊子宫内膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表达水平
            4.3.4 circ-9110过表达和干扰效率检测
            4.3.5 circ-9110对ESCs活力的影响
            4.3.6 circ-9110对ESCs增殖的影响
            4.3.7 circ-9110对ESCs周期的影响
            4.3.8 circ-9110对ESCs凋亡的影响
            4.3.9 circ-9110对ESCs凋亡相关蛋白表达的影响
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 circ-9110/miR-100-5p/HOXA1 调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究
        5.1 引言
        5.2 材料与方法
            5.2.1 试验仪器
            5.2.2 材料试剂
            5.2.3 试验动物
            5.2.4 细胞培养
            5.2.5 蛋白提取和Western blot分析
            5.2.6 统计学分析
        5.3 结果
            5.3.1 miR-100-5p对 PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响
            5.3.2 HOXA1对PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响
            5.3.3 circ-9110对PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响
        5.4 讨论
        5.5 小结
结论
创新点
进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
个人简历



本文编号：3854713