黄曲霉毒素B 1 对猪流感病毒复制的促进及甘露寡糖的干预作用与机理研究
发布时间：2024-03-17 11:34
猪流感病毒(SIV)是一种正黏病毒科,流感病毒属,有囊膜、分节段的单股负链RNA病毒,是引起流感的主要病原之一。影响流感病毒感染的主要因素包括病毒、宿主和传播途径。越来越多的调查发现,不同地区或者同一地区不同猪场/猪群对同一SIV的易感性和感染程度存在很大差异,使人们认识到外界环境和宿主营养条件对抵抗SIV感染的重要性。黄曲霉毒素B1(AFB1)是目前最常见的一种霉菌毒素,广泛存在于发霉的玉米、小麦和花生等农作物中,具有影响宿主免疫和降低生长性能等作用。所以,在本研究中我们提出AFB1可能促进SIV复制,并深入探讨其作用机理。考虑到猪在SIV传播中的重要地位以及AFB1的广泛暴露,找到一种能够防止猪群免受AFB1暴露和SIV侵害的营养物质变得尤为重要。α-甘露寡糖又称为甘露低聚糖,是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质,可通过物理吸附或直接结合霉菌毒素,消除毒素对机体的有害影响,同时具有增强免疫、促生长及抗病毒等生物学功能。所以,本研究通过体内、体外添加α-MOS来研究其对AFB1促进SIV复制的干预作用及其作用机理。一、AFB1对SIV复制的影响研究本试验中,我们首先检测不同...
【文章页数】：171 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号与缩略语
前言
第一篇 文献综述
第一章 黄曲霉毒素B1的研究进展
1. 霉菌毒素概述
2. 黄曲霉毒素B1(AFB1)概述
2.1 AFB1的来源
2.2 AFB1的分布
2.3 AFB1的作用机制
2.4 AFB1在动物体内的代谢和影响因素
3. AFB1的危害
3.1 AFB1对机体的危害
3.2 AFB1对经济的危害
4. AFB1的防治
4.1 AFB1的人为管控
4.2 AFB1的化学防治
4.3 AFB1的生物防治
4.4 AFB1的其他防治方法
参考文献
第二章 猪流感病毒的研究进展
1. 流感病毒概述
2. 猪流感病毒(SIV)概述
2.1 SIV的易感动物
2.2 SIV感染的症状
2.3 影响SIV感染的因素
3. SIV感染的防治策略
3.1 SIV感染的预防策略
3.2 SIV感染的治疗策略
参考文献
第三章 甘露寡糖的研究进展
1. 甘露寡糖概述
2. 酵母来源甘露寡糖(A-MOS)概述
2.1 α-MOS的来源和制备
2.2 α-MOS的应用
2.3 α-MOS的作用机制
3. A-MOS对机体的影响
3.1 α-MOS对仔猪生产性能的影响
3.2 α-MOS对肠道形态和微生物的影响
3.3 α-MOS对免疫功能的影响
3.4 α-MOS对霉菌毒素毒性的影响
参考文献
第二篇 试验研究
第四章 黄曲霉毒素B1对猪流感病毒复制的影响研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 细胞活力测定
1.8 细胞乳酸脱氢酶检测
1.9 细胞凋亡测定
1.10 病毒滴度检测
1.11 动物试验设计
1.12 HE染色试验
1.13 荧光定量PCR检测
1.14 免疫印迹试验
1.15 数据统计分析
2. 结果
2.1 不同浓度AFB1对MDCK、A549和PAMs活性的影响
2.2 AFB1促进SIV在MDCK、A549和PAMs上复制
2.3 AFB1加剧SIV在小鼠肺脏中感染
2.4 AFB1加剧SIV感染所致肺组织损伤
3. 讨论
参考文献
第五章 黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的TLRS通路研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 荧光定量PCR检测
1.8 免疫印迹试验
1.9 小RNA干扰
1.10 动物试验设计
1.11 HE染色试验
1.12 免疫组化染色
1.13 数据统计分析
2. 结果
2.1 AFB1上调SIV感染的PAMs上的TLR4-NFκB-TNFα表达
2.2 TLR4干扰和NFκB抑制剂阻碍AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.3 AFB1上调SIV感染小鼠脾脏中的TLR4-NFκB-TNFα表达
2.4 TLR4敲除和抑制剂削弱AFB1促进的SIV感染及其所致炎症和肺组织损伤
3. 讨论
参考文献
第六章 黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的巨噬细胞极化机制研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 动物试验设计
1.8 小鼠肺支气管灌洗
1.9 HE染色试验
1.10 荧光定量PCR检测
1.11 免疫印迹试验
1.12 MTT法测定细胞增殖活性
1.13 流式测定细胞凋亡情况
1.14 病毒滴度检测
1.15 免疫荧光
1.16 试剂盒检测NO、TNF-α和IL-10
1.17 扫描电镜观察细胞极化
1.18 流式细胞术鉴定巨噬细胞极化
1.19 数据统计分析
2. 结果
2.1 低剂量AFB1加剧SIV感染所致肺组织损伤
2.2 低剂量AFB1促进SIV在小鼠肺脏中复制
2.3 低剂量AFB1加剧SIV感染所致炎症和脾组织损伤
2.4 低剂量AFB1促进SIV感染的小鼠肺泡巨噬细胞向M2极化
2.5 不同浓度AFB1和LPS对PAMs活性的影响
2.6 低浓度AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.7 低浓度AFB1促进SIV感染的PAMs向M2型极化
2.8 LPS刺激逆转M2极化从而降低AFB1促进的SIV复制
3. 讨论
参考文献
第七章 甘露寡糖对黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的干预作用研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞和病毒培养
1.6 动物试验设计
1.7 HE染色试验
1.8 MTT法测定细胞增殖活性
1.9 中性红法测定细胞吞噬作用
1.10 DAPI染色测定细胞活性
1.11 病毒滴度检测
1.12 免疫荧光试验
1.13 荧光定量PCR检测
1.14 免疫印迹试验
1.15 数据统计分析
2. 结果
2.1 不同浓度α-MOS对PAMs活性的影响
2.2 α-MOS阻碍AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.3 α-MOS削弱AFB1促进SIV在小鼠肺脏中复制
2.4 α-MOS缓解AFB1促进SIV复制所致小鼠肺和脾组织损伤
3. 讨论
参考文献
第八章 甘露寡糖干预黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的机理研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞和病毒培养
1.6 动物试验设计
1.7 病毒滴度检测
1.8 免疫荧光试验
1.9 免疫组化染色
1.10 荧光定量PCR检测
1.11 免疫印迹试验
1.12 试剂盒检测TNF-α
1.13 数据统计分析
2. 结果
2.1 α-MOS阻碍AFB1上调TLR4-NFκB通路在SIV感染的PAMs上表达
2.2 TLR4过表达逆转α-MOS对AFB1促进的SIV感染及其炎性反应的抑制性作用
2.3 TNF-α体外添加对AFB1促进的SIV复制无显著影响
2.4 α-MOS降低AFB1上调TLR4-NFκB通路在SIV感染的小鼠脾脏和肺脏中表达
2.5 α-MOS以TLR4依赖性方式减轻AFB1促进的SIV感染和组织损伤
3. 讨论
参考文献
全文结论
本文创新点
致谢
攻读博士学位期间科研成果
本文编号：3930970
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【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号与缩略语
前言
第一篇 文献综述
第一章 黄曲霉毒素B1的研究进展
1. 霉菌毒素概述
2. 黄曲霉毒素B1(AFB1)概述
2.1 AFB1的来源
2.2 AFB1的分布
2.3 AFB1的作用机制
2.4 AFB1在动物体内的代谢和影响因素
3. AFB1的危害
3.1 AFB1对机体的危害
3.2 AFB1对经济的危害
4. AFB1的防治
4.1 AFB1的人为管控
4.2 AFB1的化学防治
4.3 AFB1的生物防治
4.4 AFB1的其他防治方法
参考文献
第二章 猪流感病毒的研究进展
1. 流感病毒概述
2. 猪流感病毒(SIV)概述
2.1 SIV的易感动物
2.2 SIV感染的症状
2.3 影响SIV感染的因素
3. SIV感染的防治策略
3.1 SIV感染的预防策略
3.2 SIV感染的治疗策略
参考文献
第三章 甘露寡糖的研究进展
1. 甘露寡糖概述
2. 酵母来源甘露寡糖(A-MOS)概述
2.1 α-MOS的来源和制备
2.2 α-MOS的应用
2.3 α-MOS的作用机制
3. A-MOS对机体的影响
3.1 α-MOS对仔猪生产性能的影响
3.2 α-MOS对肠道形态和微生物的影响
3.3 α-MOS对免疫功能的影响
3.4 α-MOS对霉菌毒素毒性的影响
参考文献
第二篇 试验研究
第四章 黄曲霉毒素B1对猪流感病毒复制的影响研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 细胞活力测定
1.8 细胞乳酸脱氢酶检测
1.9 细胞凋亡测定
1.10 病毒滴度检测
1.11 动物试验设计
1.12 HE染色试验
1.13 荧光定量PCR检测
1.14 免疫印迹试验
1.15 数据统计分析
2. 结果
2.1 不同浓度AFB1对MDCK、A549和PAMs活性的影响
2.2 AFB1促进SIV在MDCK、A549和PAMs上复制
2.3 AFB1加剧SIV在小鼠肺脏中感染
2.4 AFB1加剧SIV感染所致肺组织损伤
3. 讨论
参考文献
第五章 黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的TLRS通路研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 荧光定量PCR检测
1.8 免疫印迹试验
1.9 小RNA干扰
1.10 动物试验设计
1.11 HE染色试验
1.12 免疫组化染色
1.13 数据统计分析
2. 结果
2.1 AFB1上调SIV感染的PAMs上的TLR4-NFκB-TNFα表达
2.2 TLR4干扰和NFκB抑制剂阻碍AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.3 AFB1上调SIV感染小鼠脾脏中的TLR4-NFκB-TNFα表达
2.4 TLR4敲除和抑制剂削弱AFB1促进的SIV感染及其所致炎症和肺组织损伤
3. 讨论
参考文献
第六章 黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的巨噬细胞极化机制研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞的传代培养
1.6 病毒培养和扩增
1.7 动物试验设计
1.8 小鼠肺支气管灌洗
1.9 HE染色试验
1.10 荧光定量PCR检测
1.11 免疫印迹试验
1.12 MTT法测定细胞增殖活性
1.13 流式测定细胞凋亡情况
1.14 病毒滴度检测
1.15 免疫荧光
1.16 试剂盒检测NO、TNF-α和IL-10
1.17 扫描电镜观察细胞极化
1.18 流式细胞术鉴定巨噬细胞极化
1.19 数据统计分析
2. 结果
2.1 低剂量AFB1加剧SIV感染所致肺组织损伤
2.2 低剂量AFB1促进SIV在小鼠肺脏中复制
2.3 低剂量AFB1加剧SIV感染所致炎症和脾组织损伤
2.4 低剂量AFB1促进SIV感染的小鼠肺泡巨噬细胞向M2极化
2.5 不同浓度AFB1和LPS对PAMs活性的影响
2.6 低浓度AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.7 低浓度AFB1促进SIV感染的PAMs向M2型极化
2.8 LPS刺激逆转M2极化从而降低AFB1促进的SIV复制
3. 讨论
参考文献
第七章 甘露寡糖对黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的干预作用研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞和病毒培养
1.6 动物试验设计
1.7 HE染色试验
1.8 MTT法测定细胞增殖活性
1.9 中性红法测定细胞吞噬作用
1.10 DAPI染色测定细胞活性
1.11 病毒滴度检测
1.12 免疫荧光试验
1.13 荧光定量PCR检测
1.14 免疫印迹试验
1.15 数据统计分析
2. 结果
2.1 不同浓度α-MOS对PAMs活性的影响
2.2 α-MOS阻碍AFB1促进SIV在PAMs上复制
2.3 α-MOS削弱AFB1促进SIV在小鼠肺脏中复制
2.4 α-MOS缓解AFB1促进SIV复制所致小鼠肺和脾组织损伤
3. 讨论
参考文献
第八章 甘露寡糖干预黄曲霉毒素B1促进猪流感病毒复制的机理研究
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 主要试剂
1.3 试验仪器
1.4 工作溶液的配置
1.5 细胞和病毒培养
1.6 动物试验设计
1.7 病毒滴度检测
1.8 免疫荧光试验
1.9 免疫组化染色
1.10 荧光定量PCR检测
1.11 免疫印迹试验
1.12 试剂盒检测TNF-α
1.13 数据统计分析
2. 结果
2.1 α-MOS阻碍AFB1上调TLR4-NFκB通路在SIV感染的PAMs上表达
2.2 TLR4过表达逆转α-MOS对AFB1促进的SIV感染及其炎性反应的抑制性作用
2.3 TNF-α体外添加对AFB1促进的SIV复制无显著影响
2.4 α-MOS降低AFB1上调TLR4-NFκB通路在SIV感染的小鼠脾脏和肺脏中表达
2.5 α-MOS以TLR4依赖性方式减轻AFB1促进的SIV感染和组织损伤
3. 讨论
参考文献
全文结论
本文创新点
致谢
攻读博士学位期间科研成果
本文编号：3930970
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