肿瘤相关成纤维细胞在非小细胞肺癌转移及耐药中的作用及分子机制研究

发布时间：2022-12-04 11:57

　　研究目的肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率也高居世界首位。根据组织病理学特点肺癌可分为两大类:小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）,其中85%肺癌的病理类型为NSCLC。目前NSCLC最有效的治疗方法是手术治疗,但由于早期难以发现、易发生转移和耐药等原因,难以实现有效根治,NSCLC患者的5年生存率不足20%。化疗是治疗NSCLC的另一重要手段,但最终都不可避免的发生转移或者耐药。肿瘤细胞侵袭和转移几乎是所有癌症治疗失败的主要原因,肿瘤细胞耐药也是彻底清除肿瘤的一大障碍。因此,深入了解NSCLC细胞侵袭转移及耐药的具体分子机制,进一步探索有效的治疗策略,是提高治疗效果和患者生存率的关键。肿瘤细胞侵袭转移和耐药的发生除受自身基因的调控外,还受到肿瘤微环境多方面的影响。肿瘤细胞可通过分泌多种细胞因子影响肿瘤微环境细胞的增殖和分布,同时后者也可做出应答,如为肿瘤组织提供骨架支撑,分泌多种因子促进肿瘤组织血管生成,促进肿瘤细胞增殖、侵袭和耐药等。存在于肿瘤组织中的... 

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、实验材料和仪器
    1.1 实验材料
        1.1.1 细胞系和临床标本
        1.1.2 主要试剂
    1.2 实验仪器及耗材
二、CAFS和 NFS的分离及鉴定
    2.1 方法
        2.1.1 成纤维细胞分离
        2.1.2 细胞培养
        2.1.3 PCR
        2.1.4 Western blot
        2.1.5 免疫荧光
    2.2 结果
        2.2.1 CAFs和 NFs的形态观察
        2.2.2 CAFs和 NFs相关分子标志物检测
    2.3 讨论
三、CAFS通过IL-6/STAT3 通路促进NSCLC细胞侵袭转移
    3.1 方法
        3.1.1 上清收集
        3.1.2 CCK8 测细胞增殖
        3.1.3划痕实验
        3.1.4小室实验
        3.1.5 ELISA
        3.1.6动物实验
        3.1.7 苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)
        3.1.8 免疫组化
        3.1.9 组织RNA、蛋白提取
    3.2 结果
        3.2.1 CAF-CM可促进NSCLC细胞增殖并使肺癌细胞形态发生改变
        3.2.2 CAF-CM可提高肺癌细胞侵袭转移能力
        3.2.3 CAF-CM可诱导NSCLC细胞发生EMT并上调侵袭转移相关蛋白的表达
        3.2.4 CAFs可通过分泌IL-6 促进NSCLC细胞侵袭转移
        3.2.5 IL-6 可通过激活JAK2/STAT3 通路促进NSCLC细胞侵袭转移
        3.2.6 抑制JAK2/STAT3 通路可显著削弱CAFs对 NSCLC细胞侵袭转移的促进作用
        3.2.7 CAFs在体内可促进肿瘤细胞生长
        3.2.8 CAFs在体内也可激活肺癌细胞内JAK2/STAT3 通路并诱导NSCLC细胞发生EMT
    3.3 讨论
四、CAFS通过ANXA3/JNK通路增强肺癌细胞对顺铂耐药
    4.1 方法
        4.1.1 CCK8 检测顺铂对肺癌细胞的毒性作用
        4.1.2 ANXA3 过表达质粒构建
        4.1.3 细胞瞬时转染
        4.1.4 流式测细胞凋亡
        4.1.5动物实验
    4.2 结果
        4.2.1 CAFs可促进NSCLC细胞对顺铂耐药
        4.2.2 CAFs中高表达ANXA3 且可上调肺癌细胞内ANXA3 的表达
        4.2.3 CAFs通过分泌ANXA3 蛋白上调肺癌细胞内ANXA3 的表达
        4.2.4 过表达ANXA3 可增强肺癌细胞对顺铂的耐药性
        4.2.5 ANXA3 中和抗体可削弱 CAF-CM 对肺癌细胞顺铂耐药的促进作用
        4.2.6 ANXA3 可激活肺癌细胞内JNK/Survivin通路从而抑制凋亡
        4.2.7 抑制JNK通路可增强肺癌细胞对顺铂的敏感性
        4.2.8 动物实验进一步探究CAFs在体内对肺癌细胞顺铂敏感性的影响
    4.3 讨论
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 肿瘤相关成纤维细胞在肿瘤中作用的研究进展
    参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-37b suppresses epithelial mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma by inhibiting IL-6/STAT3 signaling[J]. Xing-Yu Pu,Dao-Feng Zheng,Ai Shen,Hai-Tao Gu,Xu-Fu Wei,Tong Mou,Jian-Bo Zhang,Rui Liu.  Hepatobiliary ＆ Pancreatic Diseases International. 2018(05)
[2]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)
[3]The VEGF signaling pathway in cancer: the road ahead[J]. Steven A. Stacker,Marc G. Achen.  Chinese Journal of Cancer. 2013(06)



本文编号：3708222