冬凌草甲素对非小细胞肺癌细胞增殖和顺铂耐药的作用及机制研究

发布时间：2022-12-04 14:44

　　肺脏是人体的呼吸器官,由气管、支气管和肺泡构成。来源于肺的上皮性恶性肿瘤称为肺癌,是目前发病率和死亡率增长最快,对人类健康影响最大的恶性肿瘤之一。恶性肿瘤的生物学特性有增殖、浸润和转移,共同决定肿瘤的恶性程度,因此肺癌首要的治疗原则是抑制肺癌细胞的增殖。在中晚期肺癌的治疗中,顺铂是一线化疗药物,然而63%左右的肺癌患者在治疗中表现着对顺铂的耐药,这严重影响了肺癌患者的预后和中位生存期。因此阐明肿瘤增殖和顺铂耐药的机制并研发具有抑制作用的药物是肺癌研究的重点。研究表明,肿瘤细胞的增殖与细胞周期的紊乱密切相关,而细胞自噬和凋亡能够调节细胞周期过程并影响肿瘤细胞的增殖。另外化疗药物顺铂的作用机理是通过与细胞内的DNA结合形成化合物,抑制细胞的转录和复制过程,引起肿瘤细胞的凋亡而发挥作用。由此可知,DNA是顺铂的主要作用靶点,影响顺铂与DNA的结合或者后续的细胞凋亡过程都可以导致顺铂耐药的出现。研究表明,与此相关的分子通路包括氧化应激、细胞凋亡、自噬和铁死亡等。天然药物中能够分离出有明确的化学结构的单体,同时具有广泛的生物活性,如抗氧化、抗炎症和抗肿瘤等。与现代医学常规治疗手段相比,天然化合物... 

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 文献综述
    1.1 非小细胞肺癌的治疗
        1.1.1 非小细胞肺癌概述
        1.1.2 非小细胞肺癌治疗方法总论
        1.1.3 治疗现状及存在问题
    1.2 肿瘤增殖的分子机制
        1.2.1 细胞自噬与肿瘤增殖
        1.2.2 Nrf2 与肿瘤增殖
        1.2.3 MAPK与肿瘤增殖
        1.2.4 Wnt与肿瘤增殖
        1.2.5 非编码RNA与肿瘤增殖
        1.2.6 细胞凋亡与肿瘤增殖
    1.3 肿瘤的化疗耐药的分子机制
        1.3.1 铁死亡与化疗耐药
        1.3.2 细胞自噬与化疗耐药
        1.3.3 细胞凋亡与化疗耐药
        1.3.4 Nrf2 与化疗耐药
        1.3.5 非编码RNA与化疗耐药
    1.4 中药治疗对肿瘤增殖和化疗耐药的作用
        1.4.1 白藜芦醇
        1.4.2 紫檀芪
    1.5 冬凌草甲素对肿瘤增殖和化疗耐药的作用
        1.5.1 冬凌草甲素抑制肿瘤增殖
        1.5.2 冬凌草甲素逆转化疗耐药
第2章 冬凌草甲素抑制肺腺癌普通株增殖的机制研究
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 细胞
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 药物配制
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3细胞活力测定(CCK8)实验
        2.2.4 提取总蛋白
        2.2.5 蛋白印迹
        2.2.6 免疫荧光
        2.2.7 自噬小体检测
        2.2.8 吖啶橙染色
        2.2.9 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 冬凌草甲素可以抑制肺癌细胞A549 的增殖
        2.3.2 冬凌草甲素诱导自噬相关蛋白的激活
        2.3.3 冬凌草甲素增强CQ对酸性物质产生的诱导作用
        2.3.4 冬凌草甲素增强CQ对 LC3B蛋白的诱导作用
        2.3.5 冬凌草甲素增强CQ对 LC3B表达的诱导作用
        2.3.6 冬凌草甲素可引起AMPK/Akt/mTOR通路的激活
        2.3.7 冬凌草甲素可以引起促凋亡蛋白的激活
        2.3.8 冬凌草甲素通过AMPK调控Akt/mTOR通路
        2.3.9 冬凌草甲素通过AMPK调控自噬小体的含量
        2.3.10 冬凌草甲素通过AMPK调控LC3B的表达
        2.3.11 冬凌草甲素通过AMPK调控自噬相关蛋白的表达
        2.3.12 冬凌草甲素通过AMPK调控细胞凋亡过程
        2.3.13 冬凌草甲素通过自噬小体的积累发挥抗癌作用
        2.3.14 3-MA能够抑制Ori对自噬相关蛋白的作用
        2.3.15 3-MA能够抑制Ori对凋亡相关蛋白的作用
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 冬凌草甲素增强肺腺癌普通株对顺铂的敏感性的机制研究
    3.1 材料
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 细胞
        3.1.4 主要试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 AnnexinⅤ/PI双染法
    3.3 结果
        3.3.1 冬凌草甲素协同顺铂显著抑制A549 细胞增殖
        3.3.2 冬凌草甲素联合顺铂显著增多A549 细胞自噬小体的含量
        3.3.3 冬凌草甲素联合顺铂显著增强A549 细胞LC3B的表达
        3.3.4 冬凌草甲素联合顺铂显著增强A549 细胞自噬相关蛋白的表达
        3.3.5 冬凌草甲素联合顺铂显著增强A549 细胞AMPK的磷酸化并且抑制Akt/mTOR的磷酸化水平
        3.3.6 冬凌草甲素联合顺铂显著增强A549 细胞中凋亡细胞的比例
        3.3.7 冬凌草甲素联合顺铂显著增强A549 细胞促凋亡蛋白的表达并且抑制抗凋亡蛋白水平
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 肺腺癌耐药株顺铂耐药的机制研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要仪器
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 细胞
        4.1.4 主要试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1克隆形成实验
    4.3 结果
        4.3.1 顺铂对A549和A549/DDP细胞生存率的影响
        4.3.2 铁死亡的不完全激活与肺腺癌的顺铂耐药有关
        4.3.3 自噬的抑制与肺腺癌的顺铂耐药有关
        4.3.4 Nrf2 的活化与肺腺癌的顺铂耐药有关
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 冬凌草甲素逆转顺铂耐药的机制研究
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要试剂
        5.1.2 主要试剂配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 免疫荧光染色
    5.3 结果
        5.3.1 冬凌草甲素能够抑制A549/DDP细胞的增殖
        5.3.2 冬凌草甲素显著抑制A549/DDP细胞克隆数
        5.3.3 冬凌草甲素对A549/DDP细胞增殖的抑制作用与铁死亡有关
        5.3.4 冬凌草甲素调控A549/DDP细胞铁死亡相关蛋白的表达
        5.3.5 冬凌草甲素引起A549/DDP细胞脂质过氧化的激活
        5.3.6 冬凌草甲素引起A549/DDP细胞亚铁离子的激活
        5.3.7 冬凌草甲素引起A549/DDP细胞自噬的激活
        5.3.8 冬凌草甲素抑制A549/DDP细胞Nrf2/HO-1 的表达
    5.4 讨论
    5.5 小结
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Management of oligometastatic non-small cell lung cancer patients:Current controversies and future directions[J]. Felipe Cou?ago,Javier Luna,Luis Leonardo Guerrero,Blanca Vaquero,María Cecilia Guillén-Sacoto,Teresa González-Merino,Bego?a Taboada,Verónica Díaz,Belén Rubio-Viqueira,Ana Aurora Díaz-Gavela,Francisco José Marcos,Elia del Cerro.  World Journal of Clinical Oncology. 2019(10)
[2]紫檀芪抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 张晓雁,张娇,徐丽群,马志强,狄守印,高原,李小飞,闫小龙,张红梅.  中国肺癌杂志. 2018(12)



本文编号：3708455