白藜芦醇及其与顺铂联用通过EMT途径抑制乳腺癌转移的实验研究
发布时间：2023-02-27 17:54
研究目的探讨白藜芦醇及其与顺铂联用通过EMT途径抑制乳腺癌转移作用效果及其作用机制。研究方法(1)选取裸鼠进行人乳腺癌细胞异种移植瘤模型,观察白藜芦醇、顺铂及两者联用后裸鼠瘤体重量和体重的变化;肺组织切片HE染色观察裸鼠肿瘤肺转移结节的变化;试剂盒赖式法和微板法检测实验动物血清中AST、ALT、Cr、BUN的变化;Westrn blot法观察肿瘤组织转移相关蛋白表达;(2)体外实验采用人乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549细胞模型;TGF-β1诱导乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞EMT模型。白藜芦醇及其与顺铂联用对细胞活力的影响用MTS法检测;用药后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化用细胞划痕实验检测;用药后细胞迁移力和侵袭力的变化用Transwell小室检测;药物对EMT标志性蛋白及EMT相关通路蛋白表达的影响用Western blot法检测;EMT标志物表达通过免疫荧光实验观察。研究结果(1)白藜芦醇100 mg/kg与模型组相比能够明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞异种移植瘤裸鼠体内肿瘤的生长和肺转移,用药组肿瘤重量和...
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略词表
文中特定缩写词
摘要
Abstract
引言
1 中医药及中西药配伍治疗乳腺癌、防治乳腺癌转移的意义
2 药物联用(配伍)的中医药理论依据
3 中医药及中西药联用治疗乳腺癌、防治乳腺癌转移的可行性
4 体内、体外模型为实验研究提供了工具
5 防治三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer-TNBC)转移的重要意义
6 白藜芦醇在乳腺癌防治和治疗中的潜力
7 顺铂在乳腺癌治疗中的重要性和局限性
8 上皮-间质转化在乳腺癌转移中的重要意义
第一部分 白藜芦醇抑制乳腺癌细胞发生EMT并抑制乳腺癌细胞生长和转移
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 主要试剂和实验药物
2.2 实验药物和主要溶液配制
2.3 主要仪器
2.4 细胞培养
2.5 实验动物分组与用药
2.6 人乳腺癌异种移植瘤裸鼠模型的制备
2.7 标本采集
2.8 药物抑瘤率计算
2.9 裸鼠肺转移组织H&E染色
2.10 血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)检测(微板法)
2.11 血清中肌酐(CRE)检测(肌氨酸氧化酶法)
2.12 血清中尿素氮(BUN)检测(脲酶法)
2.13 MTS实验
2.14 细胞体外迁移实验
2.15 Western blot 实验
2.16 免疫荧光实验
2.17 统计学处理
3 实验结果
3.1 白藜芦醇对体外人乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用
3.1.1 白藜芦醇对MDA-M-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 细胞产生抑制作用的效应浓度
3.1.2 白藜芦醇对MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 细胞迁移能力的影响
3.2 白藜芦醇对TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的影响
3.2.1 白藜芦醇对TGF-β1 诱导发生EMT的MDA-MB-231 细胞形态的影响
3.2.2 白藜芦醇对TGF-β1 诱导发生EMT的MDA-MB-231 细胞迁移的影响
3.2.3 白藜芦醇对TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞上皮和间质标记蛋白表达的影响
3.2.4 白藜芦醇逆转TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的作用机制
3.3 白藜芦醇对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长和肺转移的抑制作用
3.3.1白藜芦醇对MDA-MB-231异种移植瘤裸鼠体内肿瘤重量的影响
3.3.2白藜芦醇对MDA-MB-231异种移植瘤裸鼠体内肿瘤肺部转移的影响
3.3.3 白藜芦醇影响裸鼠体重的变化
3.3.4 白藜芦醇对裸鼠肝肾功能的影响
4 讨论
4.1 白藜芦醇逆转乳腺癌细胞发生EMT,并抑制乳腺癌生长和转移的作用效应
4.2 白藜芦醇抑制乳腺癌生长和转移的效应体现于其抑制体外人乳腺癌细胞增殖和迁移
4.3 白藜芦醇逆转乳腺癌细胞发生EMT的效应体现于其逆转体外人乳腺癌细胞形态变化和抑制细胞迁移
4.4 白藜芦醇抑制乳腺癌生长和转移的效应体现于其抑制人乳腺癌异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长和肺转移
4.5 白藜芦醇通过逆转乳腺癌细胞发生EMT,抑制乳腺癌转移的作用机制在于调节PI3K/AKT、Smad、MMPs的表达
5 小结
第二部分 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌细胞发生EMT并抑制乳腺癌细胞转移
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 主要试剂和实验药物
2.2 实验药物和主要溶液配制
2.3 主要仪器
2.4 细胞培养
2.5 实验动物分组与用药
2.6 人乳腺癌异种移植瘤裸鼠模型的制备、样本采集、药物抑瘤率计算方法
2.7 MTS实验
2.8 细胞体外迁移实验
2.9 细胞侵袭实验
2.10 细胞划痕实验
2.11 免疫荧光实验
2.12 Western blot实验
2.13 药物联用应用效果分析
2.14 统计学处理
3 实验结果
3.1 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长的抑制作用及作用机制
3.1.1 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长的影响
3.1.2 白藜芦醇与顺铂联用对裸鼠体重的影响
3.1.3 白藜芦醇与顺铂联用对裸鼠肝肾功能的影响
3.1.4 白藜芦醇与顺铂联用抑制裸鼠原位移植瘤生长的作用机制
3.2 白藜芦醇与顺铂联用对体外人乳腺癌细胞侵袭和迁移的抑制作用及其作用机制
3.2.1 白藜芦醇、顺铂分别对MDA-MB-231 细胞产生抑制作用的效应浓度
3.2.2 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞增殖产生协同作用的药物浓度
3.2.3 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞运动能力的影响
3.2.4 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞迁移能力的影响
3.2.5 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞侵袭能力的影响
3.3 白藜芦醇与顺铂联用对TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的影响
3.3.1 白藜芦醇与顺铂联用对TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞上皮和间质标记蛋白表达的作用
3.3.2 白藜芦醇与顺铂联用逆转TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞EMT的作用机制
4 讨论
4.1 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌异种移植瘤生长,减轻顺铂毒副作用
4.2 白藜芦醇与顺铂联用抑制体外人乳腺癌细胞增殖和转移
4.3 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌增殖和转移的作用机制在于调节PI3K/AKT、Smad、NF-κB、JNK、ERK的表达
5 小结
综合讨论
1 抑制三阴性乳腺癌转移的意义
2 中医药理论为药物联用提供依据
3 上皮-间质转化(EMT)在肿瘤转移中的作用
4 本研究的不足之处及展望
创新性
结语
致谢
参考文献
附录一:文献综述
参考文献
附录二:博士期间研究成果
附录三:已发表文章
本文编号：3751179
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略词表
文中特定缩写词
摘要
Abstract
引言
1 中医药及中西药配伍治疗乳腺癌、防治乳腺癌转移的意义
2 药物联用(配伍)的中医药理论依据
3 中医药及中西药联用治疗乳腺癌、防治乳腺癌转移的可行性
4 体内、体外模型为实验研究提供了工具
5 防治三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer-TNBC)转移的重要意义
6 白藜芦醇在乳腺癌防治和治疗中的潜力
7 顺铂在乳腺癌治疗中的重要性和局限性
8 上皮-间质转化在乳腺癌转移中的重要意义
第一部分 白藜芦醇抑制乳腺癌细胞发生EMT并抑制乳腺癌细胞生长和转移
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 主要试剂和实验药物
2.2 实验药物和主要溶液配制
2.3 主要仪器
2.4 细胞培养
2.5 实验动物分组与用药
2.6 人乳腺癌异种移植瘤裸鼠模型的制备
2.7 标本采集
2.8 药物抑瘤率计算
2.9 裸鼠肺转移组织H&E染色
2.10 血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)检测(微板法)
2.11 血清中肌酐(CRE)检测(肌氨酸氧化酶法)
2.12 血清中尿素氮(BUN)检测(脲酶法)
2.13 MTS实验
2.14 细胞体外迁移实验
2.15 Western blot 实验
2.16 免疫荧光实验
2.17 统计学处理
3 实验结果
3.1 白藜芦醇对体外人乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用
3.1.1 白藜芦醇对MDA-M-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 细胞产生抑制作用的效应浓度
3.1.2 白藜芦醇对MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 细胞迁移能力的影响
3.2 白藜芦醇对TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的影响
3.2.1 白藜芦醇对TGF-β1 诱导发生EMT的MDA-MB-231 细胞形态的影响
3.2.2 白藜芦醇对TGF-β1 诱导发生EMT的MDA-MB-231 细胞迁移的影响
3.2.3 白藜芦醇对TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞上皮和间质标记蛋白表达的影响
3.2.4 白藜芦醇逆转TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的作用机制
3.3 白藜芦醇对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长和肺转移的抑制作用
3.3.1白藜芦醇对MDA-MB-231异种移植瘤裸鼠体内肿瘤重量的影响
3.3.2白藜芦醇对MDA-MB-231异种移植瘤裸鼠体内肿瘤肺部转移的影响
3.3.3 白藜芦醇影响裸鼠体重的变化
3.3.4 白藜芦醇对裸鼠肝肾功能的影响
4 讨论
4.1 白藜芦醇逆转乳腺癌细胞发生EMT,并抑制乳腺癌生长和转移的作用效应
4.2 白藜芦醇抑制乳腺癌生长和转移的效应体现于其抑制体外人乳腺癌细胞增殖和迁移
4.3 白藜芦醇逆转乳腺癌细胞发生EMT的效应体现于其逆转体外人乳腺癌细胞形态变化和抑制细胞迁移
4.4 白藜芦醇抑制乳腺癌生长和转移的效应体现于其抑制人乳腺癌异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长和肺转移
4.5 白藜芦醇通过逆转乳腺癌细胞发生EMT,抑制乳腺癌转移的作用机制在于调节PI3K/AKT、Smad、MMPs的表达
5 小结
第二部分 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌细胞发生EMT并抑制乳腺癌细胞转移
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 主要试剂和实验药物
2.2 实验药物和主要溶液配制
2.3 主要仪器
2.4 细胞培养
2.5 实验动物分组与用药
2.6 人乳腺癌异种移植瘤裸鼠模型的制备、样本采集、药物抑瘤率计算方法
2.7 MTS实验
2.8 细胞体外迁移实验
2.9 细胞侵袭实验
2.10 细胞划痕实验
2.11 免疫荧光实验
2.12 Western blot实验
2.13 药物联用应用效果分析
2.14 统计学处理
3 实验结果
3.1 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长的抑制作用及作用机制
3.1.1 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长的影响
3.1.2 白藜芦醇与顺铂联用对裸鼠体重的影响
3.1.3 白藜芦醇与顺铂联用对裸鼠肝肾功能的影响
3.1.4 白藜芦醇与顺铂联用抑制裸鼠原位移植瘤生长的作用机制
3.2 白藜芦醇与顺铂联用对体外人乳腺癌细胞侵袭和迁移的抑制作用及其作用机制
3.2.1 白藜芦醇、顺铂分别对MDA-MB-231 细胞产生抑制作用的效应浓度
3.2.2 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞增殖产生协同作用的药物浓度
3.2.3 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞运动能力的影响
3.2.4 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞迁移能力的影响
3.2.5 白藜芦醇与顺铂联用对MDA-MB-231 细胞侵袭能力的影响
3.3 白藜芦醇与顺铂联用对TGF-β1 诱导的MDA-MB-231 细胞EMT的影响
3.3.1 白藜芦醇与顺铂联用对TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞上皮和间质标记蛋白表达的作用
3.3.2 白藜芦醇与顺铂联用逆转TGF-β1 诱导的乳腺癌细胞EMT的作用机制
4 讨论
4.1 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌异种移植瘤生长,减轻顺铂毒副作用
4.2 白藜芦醇与顺铂联用抑制体外人乳腺癌细胞增殖和转移
4.3 白藜芦醇与顺铂联用抑制乳腺癌增殖和转移的作用机制在于调节PI3K/AKT、Smad、NF-κB、JNK、ERK的表达
5 小结
综合讨论
1 抑制三阴性乳腺癌转移的意义
2 中医药理论为药物联用提供依据
3 上皮-间质转化(EMT)在肿瘤转移中的作用
4 本研究的不足之处及展望
创新性
结语
致谢
参考文献
附录一:文献综述
参考文献
附录二:博士期间研究成果
附录三:已发表文章
本文编号：3751179
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3751179.html
教材专著