Netrin-1通过DCC/ERK信号通路减轻缺血性脑卒中DNA损伤的研究

发布时间：2023-07-25 00:21

　　目的DNA损伤是导致细胞凋亡的主要因素之一,减少DNA损伤可抑制细胞凋亡、死亡,是机体发生缺血性脑卒中后神经保护的重要机制。在缺血性脑卒中领域关于DNA损伤的研究较少。Netrin-1在神经系统的发育中扮演了重要的角色,除此之外,Netrin-1还可作为生存因子发挥作用。在缺血性脑卒中后,Netrin-1可能通过调节DNA损伤而减少细胞凋亡,减轻脑组织损伤,这一作用可能通过DCC/ERK信号通路实现。方法第一部分Netrin-1减轻MCAO大鼠缺血性脑损伤(1)线栓法建立大脑中动脉梗塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)大鼠模型,并予纹状体注射编码Netrin-1的腺相关病毒及对照空病毒,分别构建假手术组(Sham)、假手术+空病毒组(Sham+vector)、大脑中动脉梗塞组(MCAO)、大脑中动脉梗塞+空病毒组(MCAO+vector)、大脑中动脉梗塞+Netrin-1过表达组(MCAO+Netrin-1)干预模型。(2)通过磁共振检测各组模型梗死体积的变化,并运用mNSS评分及改良贴纸去除试验评价各组大鼠的行为学变化,使用Tunel染色评...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
附录
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Netrin-1 减轻MCAO大鼠缺血性脑损伤
    背景
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 试剂及耗材
        1.3 主要试剂配制
        1.4 仪器设备
    2 实验方法
        2.1 大脑中动脉梗塞(MCAO)模型的制备及实验分组
        2.2 病毒载体构建
        2.3 Netrin-1 过表达病毒纹状体注射
        2.4 脑组织灌注取材
        2.5 免疫蛋白印迹(Western blotting)
        2.6 核磁共振检测
        2.7 神经功能评分
        2.8 石蜡切片Tunel实验
        2.9 统计学方法
    3 结果
        3.1 Netrin-1 病毒载体在脑内表达
        3.2 Netrin-1 可减少MCAO大鼠脑梗死体积
        3.3 Netrin-1 可显著改善MCAO大鼠行为学表现
        3.4 Netrin-1 可减少MCAO大鼠脑组织细胞凋亡
    4 讨论
    5 小结
    参考文献
第二部分 Netrin-1 通过ERK信号通路发挥抗凋亡作用
    背景
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 试剂及耗材
        1.3 主要试剂配制
        1.4 仪器设备
    2 实验方法
        2.1 胎鼠皮层神经元的分离、培养,OGD模型的建立
        2.2 皮层神经元分组
        2.3 慢病毒转染皮层神经元
        2.4 免疫蛋白印迹(Western blotting)
        2.5 LDH释放检测
        2.6 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.7 彗星实验检测细胞损伤
        2.8 统计学方法
    3 结果
        3.1 皮层神经元转染Netrin-1 慢病毒
        3.2 Netrin-1对OGD诱导的皮层神经元死亡和凋亡起到保护作用
        3.3 Netrin-1 可减少皮层神经元的DNA损伤
        3.4 OGD后不同时间点Netrin-1及p-ERK的变化
        3.5 Netrin-1 可激活ERK信号通路
        3.6 Netrin-1 通过ERK信号通路发挥OGD诱导神经元损伤的保护作用
    4 讨论
    5 小结
    参考文献
第三部分 Netrin-1 通过DCC/ERK信号通路减轻DNA损伤
    背景
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 试剂及耗材
        1.3 主要试剂配制
        1.4 仪器设备
    2 实验方法
        2.1 建立MCAO模型、转染腺相关病毒及实验分组
        2.2 脑组织切片免疫荧光双标
        2.3 胎鼠皮层神经元的分离、培养,OGD模型的建立及实验分组
        2.4 慢病毒转染皮层神经元
        2.5 免疫蛋白印迹(Western blot)
        2.6 mRNA实时定量PCR(RT-PCR)的检测
        2.7 细胞免疫荧光
        2.8 细胞电镜取材及线粒体形态分析
        2.9 统计学方法
    3 结果
        3.1 Netrin-1 可上调MCAO大鼠缺血周边区DCC的表达
        3.2 Netrin-1 可上调体外氧糖剥夺模型(OGD)DCC的表达
        3.3 DCC中和抗体下调了ERK信号通路的磷酸化水平
        3.4 Netrin-1 可通过ERK信号通路上调p53及p21 表达
        3.5 Netrin-1 可减轻OGD导致的线粒体肿胀
    4 讨论
    5 小结
总结
参考文献
综述 缺血性脑卒中与DNA损伤
    参考文献
致谢



本文编号：3836799