乳腺癌中ErbB2动态泛素化与降解调控机制研究

发布时间：2023-08-25 23:02

　　肿瘤正成为威胁人类生命安全的主要因素之一,而乳腺癌在女性中发病率位居第一位,致死率也高居第二位,乳腺癌正成为威胁女性健康的重要杀手。乳腺癌根据ErbB2、ER、PR表达情况,将其分为三类:Luminal型、基底样型和ErbB2阳性乳腺癌,ErbB2 阳型乳腺癌大约占20-30%。目前针对ErbB2阳性乳腺癌除传统手术治疗外,靶向药物提供了全新希望,靶向ErbB2药物大概分为单克隆抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂以及HSP90抑制剂类等。单克隆抗体类药物的典型代表为赫赛汀,酪氨酸激酶的抑制剂主要有拉帕替尼、来那替尼,都已被FDA批准上市应用,其主要通过阻断ErbB2的下游信号通路,从而抑制肿瘤细胞的增殖以达到治疗乳腺癌的作用。ErbB2/Her2是乳腺癌治疗的重要靶向蛋白,其突变经常导致耐药和肿瘤复发。近年来的研究提示通过促进ErbB2泛素化和降解预期会减少耐药发生并提升治疗效果,但乳腺癌中ErbB2泛素化和降解的调控机制还不明确。在我们前期研究中发现乳腺癌细胞中泛素化的ErbB2被内吞到早期内体,经由晚期内体被转运到溶酶体进行降解;通过筛选内体系统上去泛素化酶,前期实验鉴定了调控泛素化Er...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
实验一 USP2抑制乳腺癌中ErbB2泛素化诱导的内吞降解
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 主要仪器与设备
            1.2 实验主要试剂及抗体
            1.3 试剂配制
        2. 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 Western blotting检测
            2.3 免疫荧光
            2.4 免疫共沉淀
            2.5 shRNA慢病毒包装
            2.6 质粒瞬时转染
            2.7 RNA提取
            2.8 实时荧光定量PCR
            2.9 USP2CRISPR-Cas9敲降细胞系构建
            2.10 EGFP-DUB融合蛋白分子构建
            2.11 转化
            2.12 乳腺癌小鼠移植瘤模型构建
            2.13 克隆形成
            2.14 统计学分析
    实验结果
        1. 调控ErbB2动态泛素化的去泛素化酶筛选
        2. USP2与ErbB2相互作用且USP2过表达可以抑制ErbB2内吞
        3. USP2敲降抑制细胞增殖同时降低ErbB2稳定性
        4. USP2抑制剂ML364可以降低ErbB2蛋白稳定性
        5. USP2负向调控ErbB2泛素化
        6. USP2为ErbB2阳性乳腺癌治疗提供新的治疗策略
        7. USP2抑制剂抑制ErbB2阳性乳腺癌生长
    讨论
    结论
    参考文献
    英文缩写
实验二 细胞膜胆固醇含量维持膜表面ErbB2的水平并为ErbB2阳性乳腺癌治疗提供契机
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 主要仪器与设备
            1.2 主要试剂和抗体
            1.3 细胞系及动物
        2. 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 Western blotting检测
            2.3 免疫荧光
            2.4 免疫共沉淀
            2.5 MTT测定细胞增殖能力实验
            2.6 划痕实验
            2.7 细胞胆固醇染色方法
            2.8 细胞凋亡检测
            2.9 组织蛋白提取
            2.10 小鼠成瘤模型建立
            2.11 统计学分析
    实验结果
        1. 细胞膜中胆固醇含量与ErbB2定位和细胞迁移有关
        2. 胆固醇丰度维持细胞表面的ErbB2水平
        3. 降低胆固醇药物增强ErbB2靶向剂抑制乳腺癌生长作用
        4. 洛伐他汀促进ErbB2泛素化介导的内吞降解
        5. 洛伐他汀与拉帕替尼协同抑制ErbB2阳性乳腺癌生长
    讨论
    结论
    参考文献
    附录
综述
    参考文献
攻读学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：3843471