星形胶质细胞缝隙连接蛋白43介导的线粒体自噬对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制
发布时间：2023-12-29 19:13
背景:缺血性脑卒中主要是由于脑组织局部血流灌注突然减少或完全中断,导致由神经元、胶质细胞及血管内皮细胞共同组成的神经血管单元(Neurovascular Unit,NVU)受损,最终导致神经功能障碍。星形胶质细胞作为NVU的重要组成部分,在脑缺血/再灌注后通过多种机制维持神经元的结构和功能。由星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)构成的半通道和缝隙连接(gap junction,GJ)已被证明在脑缺血/再灌注损伤中通过传递各种有益或有害的信息而发挥重要作用。最近的研究发现Cx43可以调节自噬的发生,而此功能与其胞间通讯功能无关。我们前期研究也发现从细胞膜转移至线粒体的Cx43可以通过稳定脑缺血后线粒体的功能从而发挥保护作用。鉴于线粒体是细胞能量代谢的重要场所,我们认为Cx43对于线粒体功能的调节是其抗脑缺血/再灌注损伤的重要方面。因此,作为细胞清除受损或者功能障碍的线粒体的重要方式——线粒体自噬,走入了我们关注的视线。然而,线粒体自噬在脑缺血/再灌注中扮演的角色及其是否参与C...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 脑缺血/再灌注损伤概述
1.2 线粒体自噬与脑缺血/再灌注损伤
1.2.1 自噬/线粒体自噬的概念
1.2.2 线粒体自噬的分子机制
1.2.3 线粒体自噬的检测方法
1.2.4 线粒体自噬在脑缺血/再灌注损伤中的研究进展
1.3 星形胶质细胞Cx43与脑缺血/再灌注损伤
1.3.1 星形胶质细胞的功能概述
1.3.2 星形胶质细胞Cx43的结构与功能
1.3.3 星形胶质细胞Cx43在脑缺血/再灌注损伤中的变化及作用
1.4 星形胶质细胞Cx43与线粒体自噬
1.5 展望
第2章 原代星形胶质细胞与神经元共培养体系及脑缺血/再灌注体外模型的建立
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 试剂配制
2.2.3 实验方法
2.2.4 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 小鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养及鉴定
2.3.2 小鼠大脑皮层神经元的培养及鉴定
2.3.3 星形胶质细胞与神经元共培养体系及OGD/R模型的建立
2.4 讨论
2.4.1 原代星形胶质细胞的培养
2.4.2 原代神经元的培养
2.4.3 星形胶质细胞与神经元共培养体系的建立
2.4.4 体外脑缺血/再灌注模型——OGD/R模型的建立
2.5 结论
第3章 星形胶质细胞在OGD/R损伤后自噬/线粒体自噬的变化规律及作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 试剂配制
3.2.3 实验方法
3.2.4 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 星形胶质细胞在OGD/R不同时间自噬相关蛋白及线粒体膜蛋白的变化
3.3.2 OGD/R后星形胶质细胞Cx43与LC3B共定位
3.3.3 星形胶质细胞在OGD/R后通过自噬清除受损的线粒体
3.3.4 增强自噬可提高星形胶质细胞在OGD/R后的存活率
3.4 讨论
3.4.1 OGD/R后星形胶质细胞自噬及线粒体自噬的变化
3.4.2 OGD/R后星形胶质细胞自噬/线粒体自噬对自身存活的影响
3.4.3 OGD/R后星形胶质细胞Cx43与自噬/线粒体自噬
3.5 结论
第4章 调控Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬及神经元存活的影响
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 试剂配制
4.2.3 实验方法
4.2.4 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 Si RNA敲低星形胶质细胞Cx43成功
4.3.2 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞存活率的影响
4.3.3 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体膜电位的影响
4.3.4 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞内ROS及释放至胞外的NO的影响
4.3.5 敲低Cx43对OGD/R后共培养体系中神经元存活率的影响
4.3.6 敲低Cx43对OGD/R后共培养体系中神经元凋亡的影响
4.3.7 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬的影响
4.3.8 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬PINK1及FUNDC1途径的影响
4.4 讨论
4.4.1 Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体功能的影响
4.4.2 Cx43对OGD/R后神经元存活的影响
4.4.3 Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬的影响
4.4.4 Cx43对OGD/R后线粒体自噬途径PINK1及FUNDC1的影响
4.5 结论
第5章 Cx43调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬及神经元存活的机制
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 试剂配制
5.2.3 实验方法
5.2.4 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 Si RNA敲低星形胶质细胞PINK1成功
5.3.2 腺病毒过表达星形胶质细胞Cx43成功
5.3.3 Cx43通过PINK1途经调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬
5.3.4 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬维持OGD/R后星形胶质细胞线粒体膜电位
5.3.5 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬清除OGD/R后星形胶质细胞内的ROS并减少NO的释放
5.3.6 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬增强OGD/R后星形胶质细胞存活率
5.3.7 Cx43通过PINK1途经介导的星形胶质细胞线粒体自噬增强OGD/R后神经元的存活率
5.3.8 Cx43通过PINK1途经介导的星形胶质细胞线粒体自噬减少OGD/R后神经元的凋亡
5.4 讨论
5.4.1 Cx43通过PINK1途经调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬
5.4.2 Cx43通过调控PINK1介导的线粒体自噬保护OGD/R后星形胶质细胞线粒体功能
5.4.3 Cx43通过调控PINK1介导的线粒体自噬改善OGD/R后神经元存活
5.5 结论
第6章 结论
第7章 主要创新点与展望
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3876270
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 脑缺血/再灌注损伤概述
1.2 线粒体自噬与脑缺血/再灌注损伤
1.2.1 自噬/线粒体自噬的概念
1.2.2 线粒体自噬的分子机制
1.2.3 线粒体自噬的检测方法
1.2.4 线粒体自噬在脑缺血/再灌注损伤中的研究进展
1.3 星形胶质细胞Cx43与脑缺血/再灌注损伤
1.3.1 星形胶质细胞的功能概述
1.3.2 星形胶质细胞Cx43的结构与功能
1.3.3 星形胶质细胞Cx43在脑缺血/再灌注损伤中的变化及作用
1.4 星形胶质细胞Cx43与线粒体自噬
1.5 展望
第2章 原代星形胶质细胞与神经元共培养体系及脑缺血/再灌注体外模型的建立
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 试剂配制
2.2.3 实验方法
2.2.4 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 小鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养及鉴定
2.3.2 小鼠大脑皮层神经元的培养及鉴定
2.3.3 星形胶质细胞与神经元共培养体系及OGD/R模型的建立
2.4 讨论
2.4.1 原代星形胶质细胞的培养
2.4.2 原代神经元的培养
2.4.3 星形胶质细胞与神经元共培养体系的建立
2.4.4 体外脑缺血/再灌注模型——OGD/R模型的建立
2.5 结论
第3章 星形胶质细胞在OGD/R损伤后自噬/线粒体自噬的变化规律及作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 试剂配制
3.2.3 实验方法
3.2.4 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 星形胶质细胞在OGD/R不同时间自噬相关蛋白及线粒体膜蛋白的变化
3.3.2 OGD/R后星形胶质细胞Cx43与LC3B共定位
3.3.3 星形胶质细胞在OGD/R后通过自噬清除受损的线粒体
3.3.4 增强自噬可提高星形胶质细胞在OGD/R后的存活率
3.4 讨论
3.4.1 OGD/R后星形胶质细胞自噬及线粒体自噬的变化
3.4.2 OGD/R后星形胶质细胞自噬/线粒体自噬对自身存活的影响
3.4.3 OGD/R后星形胶质细胞Cx43与自噬/线粒体自噬
3.5 结论
第4章 调控Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬及神经元存活的影响
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 试剂配制
4.2.3 实验方法
4.2.4 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 Si RNA敲低星形胶质细胞Cx43成功
4.3.2 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞存活率的影响
4.3.3 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体膜电位的影响
4.3.4 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞内ROS及释放至胞外的NO的影响
4.3.5 敲低Cx43对OGD/R后共培养体系中神经元存活率的影响
4.3.6 敲低Cx43对OGD/R后共培养体系中神经元凋亡的影响
4.3.7 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬的影响
4.3.8 敲低Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬PINK1及FUNDC1途径的影响
4.4 讨论
4.4.1 Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体功能的影响
4.4.2 Cx43对OGD/R后神经元存活的影响
4.4.3 Cx43对OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬的影响
4.4.4 Cx43对OGD/R后线粒体自噬途径PINK1及FUNDC1的影响
4.5 结论
第5章 Cx43调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬及神经元存活的机制
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 试剂配制
5.2.3 实验方法
5.2.4 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 Si RNA敲低星形胶质细胞PINK1成功
5.3.2 腺病毒过表达星形胶质细胞Cx43成功
5.3.3 Cx43通过PINK1途经调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬
5.3.4 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬维持OGD/R后星形胶质细胞线粒体膜电位
5.3.5 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬清除OGD/R后星形胶质细胞内的ROS并减少NO的释放
5.3.6 Cx43通过PINK1途经介导的线粒体自噬增强OGD/R后星形胶质细胞存活率
5.3.7 Cx43通过PINK1途经介导的星形胶质细胞线粒体自噬增强OGD/R后神经元的存活率
5.3.8 Cx43通过PINK1途经介导的星形胶质细胞线粒体自噬减少OGD/R后神经元的凋亡
5.4 讨论
5.4.1 Cx43通过PINK1途经调控OGD/R后星形胶质细胞线粒体自噬
5.4.2 Cx43通过调控PINK1介导的线粒体自噬保护OGD/R后星形胶质细胞线粒体功能
5.4.3 Cx43通过调控PINK1介导的线粒体自噬改善OGD/R后神经元存活
5.5 结论
第6章 结论
第7章 主要创新点与展望
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3876270
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