基于AMPK/mTOR/ULK1通路探讨自噬在缺血性脑损伤中的作用及丹酚酸B的神经保护机制
发布时间：2024-01-05 18:45
背景:自噬是机体抵抗应激、提高生存能力的重要过程。脑缺血发生后,胞内衰老和受损的成分可经自噬降解产生代谢底物被循环利用,帮助细胞维持能量稳态并提高生存率。作为中枢神经系统中主要的细胞类型,脑缺血后星形胶质细胞可通过激活自噬改变其存活及功能状态,从而对改善卒中后脑损伤及神经功能发挥重要作用。unc-51样激酶1(Unc-51 like kinase 1,ULK1)是启动自噬的关键蛋白,雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,m TOR)可通过磷酸化ULK1的丝氨酸757位点抑制其活化。既往研究表明,应激条件下激活的AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)可以解除m TOR对ULK1的抑制作用,从而促进自噬发生。然而,目前关于缺血后星形胶质细胞中AMPK/m TOR/ULK1通路对自噬调控的相关研究尚少。此外,选择性自噬是细胞对胞内特定成分的选择性清除,目前有许多研究涉及丝氨酸757位点磷酸化的ULK1(p S757-ULK1)对自噬的调控,却很少有研究探索自...
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 文献综述
1.1 缺血性脑卒中概述
1.2 自噬概述
1.2.1 自噬的生理功能
1.2.2 自噬的分子机制
1.2.3 选择性自噬
1.3 自噬在缺血性脑卒中中的作用
1.3.1 神经元自噬与缺血性脑卒中
1.3.2 神经胶质细胞自噬与缺血性脑卒中
1.3.3 脑内皮细胞自噬与缺血性脑卒中
1.4 丹酚酸B对自噬的促进作用
1.5 丹酚酸B在缺血性脑损伤中的作用
1.6 展望
第2章 脑缺血损伤体内、体外模型的建立
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验方法
2.2.3 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 小鼠大脑皮层星形胶质细胞培养体系的建立
2.3.2 小鼠大脑皮层星形胶质细胞纯度鉴定
2.3.3 小鼠大脑皮层星形胶质细胞OGD模型的建立
2.3.4 小鼠星形胶质细胞OGD模型中SalB工作浓度的选择
2.3.5 小鼠MCAO模型的建立及MCAO模型中SalB给药浓度的选择
2.4 讨论
2.5 结论
第3章 自噬在小鼠缺血性脑损伤模型中的神经保护作用及SalB对其促进作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验方法
3.2.3 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 OGD后星形胶质细胞中自噬标志物水平的上调及SalB对其促进作用
3.3.2 OGD后星形胶质细胞自噬流的增强及SalB对其促进作用
3.3.3 自噬提高OGD后星形胶质细胞的存活率及SalB对其促进作用
3.3.4 自噬降低OGD后星形胶质细胞的凋亡比率及SalB对其促进作用
3.3.5 自噬调节OGD后星形胶质细胞炎性细胞因子的释放及SalB对其调控作用
3.3.6 自噬对MCAO小鼠脑梗死体积的影响及SalB的神经保护作用
3.3.7 自噬对MCAO小鼠神经功能学评分的影响及SalB的神经保护作用
3.4 讨论
3.5 结论
第4章 AMPK/mTOR/ULK1通路对OGD后小鼠星形胶质细胞中自噬的调控及SalB对其促进作用
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验方法
4.2.3 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 OGD后星形胶质细胞自噬的增强与AMPK/mTOR/ULK信号通路的激活有关
4.3.2 SalB通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路增强OGD后星形胶质细胞自噬
4.4 讨论
4.5 结论
第5章 小鼠星形胶质细胞糖氧剥夺后pS757-ULK1的降解机制及SalB对pS757-ULK1的调控作用
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验方法
5.2.3 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 OGD后星形胶质细胞中pS757-ULK1通过自噬降解及SalB对其降解的促进作用
5.3.2 OGD后星形胶质细胞中pS757-ULK1降解与选择性自噬的关系及SalB对其调控作用
5.3.3 免疫共沉淀法探究SalB对OGD后小鼠星形胶质细胞中pS757-ULK1与选择性自噬受体连接的影响
5.3.4 免疫荧光法探究SalB对OGD后HeLa细胞中pS757-ULK1与选择性自噬受体连接的影响
5.4 讨论
5.5 结论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3877129
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 文献综述
1.1 缺血性脑卒中概述
1.2 自噬概述
1.2.1 自噬的生理功能
1.2.2 自噬的分子机制
1.2.3 选择性自噬
1.3 自噬在缺血性脑卒中中的作用
1.3.1 神经元自噬与缺血性脑卒中
1.3.2 神经胶质细胞自噬与缺血性脑卒中
1.3.3 脑内皮细胞自噬与缺血性脑卒中
1.4 丹酚酸B对自噬的促进作用
1.5 丹酚酸B在缺血性脑损伤中的作用
1.6 展望
第2章 脑缺血损伤体内、体外模型的建立
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验方法
2.2.3 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 小鼠大脑皮层星形胶质细胞培养体系的建立
2.3.2 小鼠大脑皮层星形胶质细胞纯度鉴定
2.3.3 小鼠大脑皮层星形胶质细胞OGD模型的建立
2.3.4 小鼠星形胶质细胞OGD模型中SalB工作浓度的选择
2.3.5 小鼠MCAO模型的建立及MCAO模型中SalB给药浓度的选择
2.4 讨论
2.5 结论
第3章 自噬在小鼠缺血性脑损伤模型中的神经保护作用及SalB对其促进作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验方法
3.2.3 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 OGD后星形胶质细胞中自噬标志物水平的上调及SalB对其促进作用
3.3.2 OGD后星形胶质细胞自噬流的增强及SalB对其促进作用
3.3.3 自噬提高OGD后星形胶质细胞的存活率及SalB对其促进作用
3.3.4 自噬降低OGD后星形胶质细胞的凋亡比率及SalB对其促进作用
3.3.5 自噬调节OGD后星形胶质细胞炎性细胞因子的释放及SalB对其调控作用
3.3.6 自噬对MCAO小鼠脑梗死体积的影响及SalB的神经保护作用
3.3.7 自噬对MCAO小鼠神经功能学评分的影响及SalB的神经保护作用
3.4 讨论
3.5 结论
第4章 AMPK/mTOR/ULK1通路对OGD后小鼠星形胶质细胞中自噬的调控及SalB对其促进作用
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验方法
4.2.3 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 OGD后星形胶质细胞自噬的增强与AMPK/mTOR/ULK信号通路的激活有关
4.3.2 SalB通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路增强OGD后星形胶质细胞自噬
4.4 讨论
4.5 结论
第5章 小鼠星形胶质细胞糖氧剥夺后pS757-ULK1的降解机制及SalB对pS757-ULK1的调控作用
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验方法
5.2.3 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 OGD后星形胶质细胞中pS757-ULK1通过自噬降解及SalB对其降解的促进作用
5.3.2 OGD后星形胶质细胞中pS757-ULK1降解与选择性自噬的关系及SalB对其调控作用
5.3.3 免疫共沉淀法探究SalB对OGD后小鼠星形胶质细胞中pS757-ULK1与选择性自噬受体连接的影响
5.3.4 免疫荧光法探究SalB对OGD后HeLa细胞中pS757-ULK1与选择性自噬受体连接的影响
5.4 讨论
5.5 结论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3877129
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