虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究
发布时间：2024-02-23 12:55
1.背景及目的:在我国,无论相对发病率还是绝对病例数,肝纤维化患者均居世界首位,其主要病因为:病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病或药物性肝病等,肝纤维化不仅是肝脏损伤的病理修复反应,还会进一步发展为肝硬化、肝癌、肝衰竭[1],是严重危害人民健康和消耗社会资源的难治性疾病。因此,抗肝纤维化是慢性肝病的重要治疗环节。西医学已有较多的临床试验报道,对于慢性病毒性(乙型、丙型)肝炎抗病毒治疗可有效逆转肝纤维化[2],但迄今临床上仍缺乏直接针对纤维结缔组织增生的有效治疗肝纤维化的生物或化学药物,而中药及其复方具有多组分、多途径与多环节的综合作用特点,近年来发现在抗肝纤维化治疗方面有明显优势,已经取得了较好的临床疗效,如扶正化瘀胶囊(片)、复方鳖甲软肝片等[3-5]。虫草菌丝作为中医药抗肝纤维化药物扶正化瘀胶囊/片中最重要的扶正药物,课题组前期大量研究证实以虫草菌丝为主药的扶正药物在促进肝纤维化逆转中发挥主要作用,为了解析其发挥抗肝纤维化作用的主要活性成分,课题组前期开展系列活性导向研究,并在近两年取得了可喜...
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠的干预作用研究
1 材料
1.1 动物来源
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 动物模型制备方法
2.2 血清肝功能检测
2.3 蛋白免疫印迹
2.4 肝组织HE染色
2.5 肝组织天狼猩红染色及胶原半定量
2.6 肝组织羟脯氨酸含量
2.7 肝组织和细胞总RNA抽提
2.8 Real time PCR
2.9 免疫组织化学染色
2.10 统计学方法
3 结果
3.1 各组小鼠基本情况
3.2 小鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况
3.3 C02对CCl4 肝纤维化小鼠血清ALT、AST的影响
3.4 C02对CCl4肝纤维化小鼠肝组织病理学及羟脯氨酸含量的影响
3.5 C02对CCl4 肝纤维化小鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响
3.6 C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠肝内巨噬细胞表型的影响
3.7 C02 对促纤维化相关因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响
3.8 C02对JNK/ERK/P38 信号通路的影响
3.9 C02 对巨噬细胞活化相关蛋白IRF5、STAT1 的影响
4 本章小结
第二章 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的影响
1 材料与方法
1.1 动物来源
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 动物模型制备方法
2.2 血清肝功能检测
2.3 蛋白免疫印迹
2.4 肝组织HE染色
2.5 肝组织羟脯氨酸含量
2.6 肝组织和细胞总RNA抽提
2.7 Real time PCR
2.8 免疫组织化学染色
2.9 统计学方法
3 结果
3.1 各组大鼠基本情况
3.2 大鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况
3.3 C02对DMN肝纤维化大鼠血清ALT、AST含量的影响
3.4 C02对DMN纤维化大鼠肝组织病理及羟脯氨酸含量的影响
3.5 C02对DMN肝纤维化大鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响
3.6 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝内巨噬细胞表型的调控作用
3.7 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏促纤维化因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响
3.8 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏JNK/ERK/P38 信号通路的影响
3.9 C02对巨噬细胞活化相关蛋白的影响
4 本章小结
第三章 C02对肝星状细胞及巨噬细胞的影响
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 细胞培养
2.2 分离原代小鼠肝星状细胞
2.3 原代肝星状细胞存活率鉴定
2.4 原代肝星状细胞的纯度鉴定
2.5 细胞免疫荧光检测
2.6 CCK8法检测细胞增殖
2.7 Real Time PCR
2.8 蛋白免疫印迹
2.9 ELISA检测
2.10 统计学方法
3 结果
3.1 C02对JS-1细胞活力及增殖的影响
3.2 C02对JS-1 细胞α-SMA、COL-I表达的影响
3.3 C02 对小鼠原代肝星状细胞α-SMA、COL-I表达的影响
3.4 C02对巨噬细胞的增殖及活力的影响
3.5 C02 对巨噬细胞分泌相关炎性因子PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的影响
3.6 C02 对巨噬细胞分泌PDGF-BB、TNF-α、iNOS的影响
4 本章小结
第四章 C02通过巨噬细胞影响肝星状细胞的活化
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 细胞培养
2.2 Transwell细胞共培养
2.3 细胞免疫荧光检测
2.4 CCK8法检测细胞增殖
2.5 Real Time PCR
2.6 蛋白免疫印迹
2.7 统计学方法
3 结果
3.1 共培养不同时间点巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响
3.2 共培养24h巨噬细胞CD11b、CD206 表达变化
3.3 共培养24h巨噬细胞PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的变化
3.4 共培养24h培养上清中PDGF-BB、TNF-α蛋白含量变化
3.5 共培养24h巨噬细胞IRF-5、STAT1 mRNA表达变化
3.6 共培养24h巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响
3.7 共培养24h对 JS-1 细胞ERK、P-ERK的影响
3.8 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞STAT1 mRNA变化情况
3.9 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞CD11b、CD206 mRNA的表达变化
3.10 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞分泌促炎因子PDGF-BB、TNF-α变化情况
3.11 STAT1抑制剂干预后肝星状细胞的活化情况
4 本章小结
讨论
总结
参考文献
本文的创新点
附录1 :文献综述 肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响
参考文献
附录2:在校期间发表的学术论文
本文编号：3907525
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠的干预作用研究
1 材料
1.1 动物来源
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 动物模型制备方法
2.2 血清肝功能检测
2.3 蛋白免疫印迹
2.4 肝组织HE染色
2.5 肝组织天狼猩红染色及胶原半定量
2.6 肝组织羟脯氨酸含量
2.7 肝组织和细胞总RNA抽提
2.8 Real time PCR
2.9 免疫组织化学染色
2.10 统计学方法
3 结果
3.1 各组小鼠基本情况
3.2 小鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况
3.3 C02对CCl4 肝纤维化小鼠血清ALT、AST的影响
3.4 C02对CCl4肝纤维化小鼠肝组织病理学及羟脯氨酸含量的影响
3.5 C02对CCl4 肝纤维化小鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响
3.6 C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠肝内巨噬细胞表型的影响
3.7 C02 对促纤维化相关因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响
3.8 C02对JNK/ERK/P38 信号通路的影响
3.9 C02 对巨噬细胞活化相关蛋白IRF5、STAT1 的影响
4 本章小结
第二章 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的影响
1 材料与方法
1.1 动物来源
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 动物模型制备方法
2.2 血清肝功能检测
2.3 蛋白免疫印迹
2.4 肝组织HE染色
2.5 肝组织羟脯氨酸含量
2.6 肝组织和细胞总RNA抽提
2.7 Real time PCR
2.8 免疫组织化学染色
2.9 统计学方法
3 结果
3.1 各组大鼠基本情况
3.2 大鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况
3.3 C02对DMN肝纤维化大鼠血清ALT、AST含量的影响
3.4 C02对DMN纤维化大鼠肝组织病理及羟脯氨酸含量的影响
3.5 C02对DMN肝纤维化大鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响
3.6 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝内巨噬细胞表型的调控作用
3.7 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏促纤维化因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响
3.8 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏JNK/ERK/P38 信号通路的影响
3.9 C02对巨噬细胞活化相关蛋白的影响
4 本章小结
第三章 C02对肝星状细胞及巨噬细胞的影响
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 细胞培养
2.2 分离原代小鼠肝星状细胞
2.3 原代肝星状细胞存活率鉴定
2.4 原代肝星状细胞的纯度鉴定
2.5 细胞免疫荧光检测
2.6 CCK8法检测细胞增殖
2.7 Real Time PCR
2.8 蛋白免疫印迹
2.9 ELISA检测
2.10 统计学方法
3 结果
3.1 C02对JS-1细胞活力及增殖的影响
3.2 C02对JS-1 细胞α-SMA、COL-I表达的影响
3.3 C02 对小鼠原代肝星状细胞α-SMA、COL-I表达的影响
3.4 C02对巨噬细胞的增殖及活力的影响
3.5 C02 对巨噬细胞分泌相关炎性因子PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的影响
3.6 C02 对巨噬细胞分泌PDGF-BB、TNF-α、iNOS的影响
4 本章小结
第四章 C02通过巨噬细胞影响肝星状细胞的活化
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要仪器设备
2 方法
2.1 细胞培养
2.2 Transwell细胞共培养
2.3 细胞免疫荧光检测
2.4 CCK8法检测细胞增殖
2.5 Real Time PCR
2.6 蛋白免疫印迹
2.7 统计学方法
3 结果
3.1 共培养不同时间点巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响
3.2 共培养24h巨噬细胞CD11b、CD206 表达变化
3.3 共培养24h巨噬细胞PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的变化
3.4 共培养24h培养上清中PDGF-BB、TNF-α蛋白含量变化
3.5 共培养24h巨噬细胞IRF-5、STAT1 mRNA表达变化
3.6 共培养24h巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响
3.7 共培养24h对 JS-1 细胞ERK、P-ERK的影响
3.8 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞STAT1 mRNA变化情况
3.9 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞CD11b、CD206 mRNA的表达变化
3.10 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞分泌促炎因子PDGF-BB、TNF-α变化情况
3.11 STAT1抑制剂干预后肝星状细胞的活化情况
4 本章小结
讨论
总结
参考文献
本文的创新点
附录1 :文献综述 肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响
参考文献
附录2:在校期间发表的学术论文
本文编号：3907525
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3907525.html
教材专著