凡纳滨对虾肠道益生芽孢杆菌的筛选及抗病机理研究
发布时间：2021-06-27 21:32
益生菌因其具有改善动植物及人体生长、提高营养、刺激免疫功能、提高抗病能力等有益作用,被广泛应用于食品和饲料行业。在水产养殖中应用的益生菌,不仅兼具以上优点,同时还可有效降低抗生素滥用所导致的药物残留、致病菌耐药等风险,因此成为水产养殖行业及相关研究领域的关注热点。本研究利用芽孢菌特异性筛选方法从凡纳滨对虾肠道中分离肠道益生芽孢菌,分别以产酶活力、溶血性和对宿主安全性等相关指标对所分离菌株的益生菌特性进行综合评价,筛选获得对凡纳滨对虾具有益生功能的候选益生芽孢菌。经饲喂试验,进一步确定了所获益生芽孢菌在对虾生长发育及抗病能力方面的益生作用,并对其提升凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染作用机理进行了初步研究。为凡纳滨对虾益生菌资源的开发和利用提供了理论依据和数据参考。主要研究结果如下:1.通过芽孢菌特异性分离、镜检和芽孢染色等方法,分别从凡纳滨对虾肠道、养殖池水和池底泥中分离得到芽孢杆菌33株。以菌株产胞外酶活力（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶）、溶血性及安全性评价等指标,共筛选出3株候选益生芽孢菌B5、C6、C7-1。通过综合功能比较确定了B5为候选凡纳滨对虾益生芽孢菌,经基因组16S rDNA全长测序...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各菌株蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力Figure2.1Protease,amylaseandlipaseactivityofdifferentstrains
第二章凡纳滨对虾肠道益生芽孢杆菌的筛选22图2.2菌株B5、C6、C7-1的16SrDNA构建系统发育树Figure2.2Thephylogenetictreeof16SrRNAgeneofstrainB5、C6、C7-1
沈阳农业大学硕士学位论文232.2.6安全性检测结果潜在益生芽孢杆菌的生物安全性试验结果如图2.3所示，在对凡纳滨对虾幼虾苗为期10d的潜在益生芽孢杆菌浸浴试验中，与对照组相比试验组的3株菌株均未造成凡纳滨对虾幼虾苗的大规模死亡，成活率都在80%以上，其中B5组的成活率95%，显著高于对照组的86%，C6、C7-1组的成活率分别为83%和86%，与对照组无显著差异。表明三株潜在益生芽孢杆菌在2×108cfu/mL的浓度下对凡纳滨对虾是具备安全性的，同时B5菌株对凡纳滨对虾的成活率有一定的促进作用。图2.3凡纳滨对虾幼虾苗成活率Fig2.3SurvivalrateofLitopenaeusvaannameilarva2.3讨论益生菌作为抗生素的替代品在水产养殖中的应用日益增加，通过饲料将益生菌活菌引入动物肠道，以达到平衡肠道微生物菌群、改善消化功能等效果（Gómezetal,2008;Mohapatraetal,2012;Sunetal,2011;Wangetal,2007）。研究证明益生菌可以通过补充消化酶，提高宿主饲料效率和生长速度，预防肠道疾病以及预消化饲料中难分解的营养因子，从而提高水产养殖动物的饲料利用率（Balcázaretal,2006;Suzeretal,2008），分离具有产消化酶能力的菌株是筛选此类益生菌的主要方式。目前主要应用于凡纳滨对虾养殖的益生菌多为非土著来源菌株，以陆生芽孢杆菌和光合细菌为主。这些非土著来源菌种在凡纳滨对虾养殖上的应用也存在一定弊端，非土著来源益生菌在对虾肠道中难以稳定生长并发挥作用，同时可能会对肠道原有菌群产生干扰（孟霄鹏等，2017）。与此同时，芽孢杆菌是一种好氧或兼性厌氧的革兰氏阳性菌，由于其具有耐受能力强、可以
【参考文献】：
期刊论文
[1]引起凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌MLST新序列型[J]. 孙明玉,冯博,张昭寰,徐马俊坤,刘伟奇,刘海泉,潘迎捷,赵勇. 水产学报. 2018(03)
[2]益生菌对凡纳滨对虾免疫功能及肠道菌群的影响[J]. 孟霄鹏,孟阳,王悦,杨硕,袁春营,崔青曼. 水产科学. 2017(01)
[3]凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）亲虾繁殖期水体微生物多样性[J]. 陈琼,李贵阳,罗坤,孔杰,莫照兰,栾生,李杰,曹宝祥,张玉玲. 海洋与湖沼. 2017(01)
[4]脊尾白虾肠道微生物菌群结构[J]. 沈辉,万夕和,何培民,黎慧,乔毅,蒋葛. 微生物学通报. 2015(10)
[5]南美白对虾养殖概况及病害防控措施[J]. 赵永锋,宋迁红. 科学养鱼. 2014(07)
[6]溶藻弧菌感染后凡纳滨对虾鳃组织免疫相关基因的表达[J]. 罗词兴,黄旭雄,李桑,赵利斌,危立坤,陈春燕,刘林林,曾蓓蓓. 中国水产科学. 2014(01)
[7]溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素、免疫指标及保护率的影响[J]. 谢警鸿,邱德全,刘春晓,朱卫卫,曾林. 广东海洋大学学报. 2013(01)
[8]凡纳滨对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达和活性检测[J]. 张海波,谭洪新,王兴强,吴嘉敏,秦松,陈华新,阎斌伦. 海洋科学. 2009(01)
[9]Influence of Probiotics on the Growth and Digestive Enzyme Activity of White Pacific Shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Gómez R. Geovanny D.,MA Shen. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[10]虾-鱼-贝-藻养殖结构优化试验研究[J]. 申玉春,熊邦喜,王辉,叶富良. 水生生物学报. 2007(01)
博士论文
[1]乳酸菌对凡纳滨对虾益生机理的研究[D]. 沙玉杰.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2016
[2]基于序列特征的宏基因组数据分析方法研究[D]. 丁啸.东南大学 2016
[3]对虾微生态制剂的研究和应用[D]. 李继秋.中国海洋大学 2004
硕士论文
[1]对虾养殖池塘有益芽孢杆菌的分离筛选及特性初步研究[D]. 赵坤.中国海洋大学 2014
本文编号：3253644
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各菌株蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力Figure2.1Protease,amylaseandlipaseactivityofdifferentstrains
第二章凡纳滨对虾肠道益生芽孢杆菌的筛选22图2.2菌株B5、C6、C7-1的16SrDNA构建系统发育树Figure2.2Thephylogenetictreeof16SrRNAgeneofstrainB5、C6、C7-1
沈阳农业大学硕士学位论文232.2.6安全性检测结果潜在益生芽孢杆菌的生物安全性试验结果如图2.3所示，在对凡纳滨对虾幼虾苗为期10d的潜在益生芽孢杆菌浸浴试验中，与对照组相比试验组的3株菌株均未造成凡纳滨对虾幼虾苗的大规模死亡，成活率都在80%以上，其中B5组的成活率95%，显著高于对照组的86%，C6、C7-1组的成活率分别为83%和86%，与对照组无显著差异。表明三株潜在益生芽孢杆菌在2×108cfu/mL的浓度下对凡纳滨对虾是具备安全性的，同时B5菌株对凡纳滨对虾的成活率有一定的促进作用。图2.3凡纳滨对虾幼虾苗成活率Fig2.3SurvivalrateofLitopenaeusvaannameilarva2.3讨论益生菌作为抗生素的替代品在水产养殖中的应用日益增加，通过饲料将益生菌活菌引入动物肠道，以达到平衡肠道微生物菌群、改善消化功能等效果（Gómezetal,2008;Mohapatraetal,2012;Sunetal,2011;Wangetal,2007）。研究证明益生菌可以通过补充消化酶，提高宿主饲料效率和生长速度，预防肠道疾病以及预消化饲料中难分解的营养因子，从而提高水产养殖动物的饲料利用率（Balcázaretal,2006;Suzeretal,2008），分离具有产消化酶能力的菌株是筛选此类益生菌的主要方式。目前主要应用于凡纳滨对虾养殖的益生菌多为非土著来源菌株，以陆生芽孢杆菌和光合细菌为主。这些非土著来源菌种在凡纳滨对虾养殖上的应用也存在一定弊端，非土著来源益生菌在对虾肠道中难以稳定生长并发挥作用，同时可能会对肠道原有菌群产生干扰（孟霄鹏等，2017）。与此同时，芽孢杆菌是一种好氧或兼性厌氧的革兰氏阳性菌，由于其具有耐受能力强、可以
【参考文献】：
期刊论文
[1]引起凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌MLST新序列型[J]. 孙明玉,冯博,张昭寰,徐马俊坤,刘伟奇,刘海泉,潘迎捷,赵勇. 水产学报. 2018(03)
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[6]溶藻弧菌感染后凡纳滨对虾鳃组织免疫相关基因的表达[J]. 罗词兴,黄旭雄,李桑,赵利斌,危立坤,陈春燕,刘林林,曾蓓蓓. 中国水产科学. 2014(01)
[7]溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素、免疫指标及保护率的影响[J]. 谢警鸿,邱德全,刘春晓,朱卫卫,曾林. 广东海洋大学学报. 2013(01)
[8]凡纳滨对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达和活性检测[J]. 张海波,谭洪新,王兴强,吴嘉敏,秦松,陈华新,阎斌伦. 海洋科学. 2009(01)
[9]Influence of Probiotics on the Growth and Digestive Enzyme Activity of White Pacific Shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Gómez R. Geovanny D.,MA Shen. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[10]虾-鱼-贝-藻养殖结构优化试验研究[J]. 申玉春,熊邦喜,王辉,叶富良. 水生生物学报. 2007(01)
博士论文
[1]乳酸菌对凡纳滨对虾益生机理的研究[D]. 沙玉杰.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2016
[2]基于序列特征的宏基因组数据分析方法研究[D]. 丁啸.东南大学 2016
[3]对虾微生态制剂的研究和应用[D]. 李继秋.中国海洋大学 2004
硕士论文
[1]对虾养殖池塘有益芽孢杆菌的分离筛选及特性初步研究[D]. 赵坤.中国海洋大学 2014
本文编号：3253644
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3253644.html
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