卫矛与藜上病毒的检测与鉴定

发布时间：2021-08-08 16:37

　　本研究使用了转录组测序技术、RT-PCR扩增技术以及透射电镜观察等实验技术,对辽宁沈阳地区采集到的桃叶卫矛黄斑驳叶片样品和藜皱缩叶片样品进行分析。通过鉴定得出结论:桃叶卫矛黄斑驳病症伴随的是这一症状的病毒是一种新病毒,该病毒属于甲型线性病毒科（Alphaflexiviridae）马铃薯X病毒属（Potexvirus）;藜叶片皱缩病症伴随的是豇豆花叶病毒科（Comovirinae）蚕豆病毒属（Fabavirus）中的蚕豆萎蔫病毒2号（Broad Bean Wilt Virus 2,BBWV2）。本研究不仅发现了一种新的可以感染木本植物的病毒资源,扩充了植物病毒资源库,还进一步丰富了已知病毒可侵染宿主的范围,同时也部分奠定了植物病毒病防治的理论基础。2018年7月,在辽宁沈阳地区采集到了表象症状为黄色斑驳的桃叶卫矛疑似染病叶片。使用电子透镜技术观察到了大小约为500×13nm的线型病毒粒子。在后续实验中使用转录组测序技术与RT-PCR分子克隆技术在该样品分离物中扩增并得到一种Potexvirus属病毒。完整的病毒基因组长度为6,784个核苷酸（不包括poly（A）尾巴）,其中包含5个开放阅... 

【文章来源】：沈阳大学辽宁省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 植物病毒的研究概况
    1.2 植物病毒的鉴定方法
        1.2.1 生物学测定法
        1.2.2 电子显微镜技术
        1.2.3 酶联免疫法
        1.2.4 分子生物学测定法
        1.2.5 第二代测序检测法(NGS)
    1.3 桃叶卫矛与藜植物与病毒病害简介
        1.3.1 桃叶卫矛及其毒病
        1.3.2 藜及藜病毒病
    1.4 研究意义
    1.5 实验方案
第2章 桃叶卫矛病毒病的分子鉴定与分析
    2.1 实验材料及试剂
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 菌株及质粒载体
        2.1.3 实验使用试剂
        2.1.4 主要实验设备
    2.2 测序与设计引物
    2.3 实验方法
        2.3.1 病毒电镜观察
        2.3.2 植物病毒总RNA的提取
        2.3.3 桃叶卫矛上病毒的RT-PCR检测
        2.3.4 PCR产物纯化及回收
        2.3.5 DNA分子克隆
        2.3.6 重组质粒的提取及鉴定
        2.3.7 序列分析
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 桃叶卫矛病叶样品电镜观察结果
        2.4.2 RT-PCR检测结果
        2.4.3 序列分析
    2.5 讨论
第3章 藜病毒病的分子鉴定与分析
    3.1 实验材料及菌株
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 感受态细胞及载体
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 主要实验设备
    3.2 引物的设计与合成
    3.3 实验方法
        3.3.1 TRIzol法提取植物总RNA
        3.3.2 藜上病毒的RT-PCR检测
        3.3.3 PCR产物纯化及回收
        3.3.4 DNA分子克隆
        3.3.5 重组质粒的提取与鉴定
        3.3.6 序列分析
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 RT-PCR检测结果
        3.4.2 序列分析
    3.5 讨论
第4章 结论
参考文献
在学期间研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]蚕豆萎蔫病毒2号板蓝根分离株全基因组序列测定与分析[J]. 王宝霞,齐永红,辛敏,崔丽艳,王德富,牛颜冰.  中国生物化学与分子生物学报. 2019(03)
[2]蚕豆萎蔫病毒2号安徽分离物全基因组序列测定与分析[J]. 严丹侃,郑红英,张海珊,沈艳,顾江涛,章东方,燕飞.  植物保护. 2018(01)
[3]药用植物柴胡病毒病病原物的分子鉴定[J]. 寇丽莎,赵慧琪,王德富,郭尚,牛颜冰.  病毒学报. 2017(04)
[4]太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重RT-PCR检测[J]. 匡云波,陈满足,陆伊荣,陈晶,叶祖云.  园艺学报. 2017(04)
[5]藜草花叶病毒的研究概述[J]. 冯黎霞,赵立荣,武目涛,于璇.  中国蔬菜. 2016(08)
[6]侵染白术的蚕豆萎蔫病毒2号的分子检测与序列分析[J]. 牛颜冰,时晓丽,张西梅,赵慧琪,赵保佳.  病毒学报. 2015(01)
[7]中国植物病毒研究40年[J]. 陈晓英,方荣祥.  微生物学通报. 2014(03)
[8]蚕豆萎蔫病毒2号（BBWV2）基因组RNA2的序列测定[J]. 许新江.  新疆农垦科技. 2013(12)
[9]侵染加工番茄的BBWV2的分子鉴定及田间检测[J]. 张建云,许文博,刘升学,黄家风.  石河子大学学报(自然科学版). 2013(06)
[10]影响桃叶卫矛叶斑病病菌发生的环境条件[J]. 胡延生.  经济林研究. 2013(03)

博士论文
[1]小RNA深度测序在几种木本植物病毒鉴定中的应用[D]. 苏秀.浙江大学 2015

硕士论文
[1]沈阳三种木本植物病毒病的分子检测与鉴定[D]. 韩彤.沈阳大学 2018
[2]石河子加工辣椒病毒病的调查与研究[D]. 刘娟娟.石河子大学 2014
[3]番茄斑萎病毒属的分子检测技术研究[D]. 杨英华.江西农业大学 2012
[4]四种检疫性植物病毒的胶体金免疫层析试纸条的研究[D]. 张晓雷.安徽农业大学 2009
[5]拟南芥MAG2基因在胁迫条件下对种子萌发及幼苗生长的影响[D]. 张波.兰州大学 2009
[6]干种子中大豆花叶病毒（SMV）和菜豆普通花叶病毒（BCMV）的分子检测技术研究[D]. 王杰.西北农林科技大学 2005
[7]几种林木病毒鉴定与林业微生物菌种数据库查询系统构建[D]. 黄金光.中国农业大学 2004



本文编号：3330303