临床酮病奶牛血液高浓度NEFA对乳蛋白与乳脂合成的影响
发布时间：2021-08-21 08:04
酮病是围产期奶牛泌乳初期常见的糖脂代谢障碍性疾病。患临床酮病的奶牛血浆非酯化脂肪酸（NEFA）与酮体浓度显著升高,并表现出乳蛋白率降低、乳脂率升高等特征。血液中高浓度的NEFA能够被奶牛乳腺组织吸收,并用于合成乳脂。乳蛋白与乳脂的合成受到诸多因素的影响。其中JAK2/STAT5与mTOR信号通路是调节乳蛋白合成的核心途径;诱导细胞凋亡的DFF45样因子A（CIDEA）是脂滴相关蛋白,与脂质代谢密切相关。已有研究表明,在小鼠乳腺组织中,CIDEA参与乳脂的合成与分泌,并直接影响新生小鼠存活率,且在泌乳奶牛乳腺组织中高表达。但临床酮病奶牛高NEFA是否参与以及如何调控乳腺组织乳蛋白和乳脂的合成尚不清楚。因此,本实验通过采集健康与临床酮病奶牛乳腺组织,体外分离培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）并添加不同浓度NEFA,研究高浓度NEFA对乳蛋白和乳脂合成与分泌的影响及机制。采集健康奶牛与临床酮病奶牛的血液和乳汁样本,检测血清代谢指标并进行乳成分分析。结果表明,临床酮病奶牛血液中NEFA、乳中乳脂率显著高于健康奶牛,乳蛋白率显著低于健康奶牛。为进一步研究高浓度NEFA分别对乳蛋白与乳脂合成的影响...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪组织中脂肪酸(Fa)的动态循环
第二篇研究内容第2章高浓度NEFA对临床酮病奶牛乳蛋白合成的影响35图2.1临床酮病对奶牛乳腺中β-casein表达水平、JAK2/STAT5及mTOR信号通路重要分子磷酸化水平的影响。（A）β-casein、p-mTOR、mTOR、p-S6K1、S6K1、p-JAK2、JAK2、p-STAT5、STAT5、β-actin的蛋白Westernblotting结果。（B）β-casein的相对蛋白到达水平。（C-F）p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1、p-JAK2/JAK2、p-STAT5/STAT5蛋白的磷酸化比值。数据表示为平均值±SEM（n=15）。Fig.2.1Theeffectofclinicalketosisontheabundanceofβ-casein,thephosphorylationlevelofJAK2/STAT5andmTORsignalingpathwayonthebovinemammarygland.(A)Westernblottinganalysisofβ-casein,p-mTOR,mTOR,p-S6K1,S6K1p-JAK2,JAK2,p-STAT5andSTAT5.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C-F)Theratioofp-mTOR/mTOR,p-S6K1/S6K1,p-JAK2/JAK2andp-STAT5/STAT5inBMEC.Thedatawereexpressedasthemean±SEM(n=15pergroup).
第二篇研究内容第2章高浓度NEFA对临床酮病奶牛乳蛋白合成的影响362.3.2免疫荧光（IF）鉴定BMEC利用免疫荧光（IF）对分离培养的BMEC中的骨架蛋白CK-18的表达进行了检测。结果如图2.2显示，纯化后的细胞均高表达CK-18，表明分离纯化后用于实验的细胞为BMEC。图2.2免疫荧光检测BMEC中CK-18的表达（bar=10μm）。蓝光荧光部分为DAPI染色的细胞核，绿光荧光部分为染色的CK-18。Fig.2.2IFdetectstheexpressionofCK-18inBMEC（bar=10μm）。ThebluefluorescentpartisDAPIstainednucleusandthegreenfluorescentpartisstainedCK-18.2.3.3不同浓度NEFA对BMEC中β-casein的mRNA和蛋白表达量的影响在BMEC中添加不同浓度的NEFA，通过qRT-PCR和WesternBlotting技术，检测了BMEC中β-casein的mRNA丰度和蛋白表达量。结果显示，BMEC中β-casein的表达水平随添加的NEFA浓度的增加而减少（P<0.01,图2.3）。说明高浓度NEFA能够抑制BMEC中β-casein的表达。图2.3NEFA抑制BMEC中β-casein的表达。BMEC添加0,0.3,0.6,or1.2mM的NEFA处理24h。（A）β-casein蛋白的Westernblotting结果。（B）β-casein的相对蛋白表达水平。（C）β-caseinmRNA表达水平。Fig.2.3NEFAnegativelyregulatestheabundanceofβ-caseininBMEC.Thecellswereculturedwith0,0.3,0.6,or1.2mMNEFAfor24h.(A)Westernblottinganalysisofβ-caseininBMEC.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C)RelativemRNAabundanceofβ-caseininBMEC.
【参考文献】：
期刊论文
[1]亚临床酮病对泌乳早期奶牛繁殖性能的影响[J]. 张锋,白云龙,宋玉锡,孙书函,夏成,徐闯,张洪友. 现代畜牧兽医. 2019(06)
[2]浅谈奶牛酮病与DHI数据的关系及其预防措施[J]. 翟卫爽,蒋业慧,李红燕,孙岩,田晓阳. 中国奶牛. 2018(07)
[3]上海地区奶牛产后低钙血症及酮病发病率调查[J]. 边四辈,黄克和. 中国畜牧杂志. 2018(01)
[4]奶牛围产期疾病的发病原因及预防措施[J]. 任卫青,周二艳,常瑶瑶. 当代畜牧. 2017(12)
[5]酮病对奶牛生产性能和繁殖性能的影响[J]. 朱奎玲,沈泰钰,于洪江,张子扬,高三思,许秋实,杨威,徐闯. 黑龙江畜牧兽医. 2017(04)
[6]Amino acids and mammary gland development:nutritional implications for milk production and neonatal growth[J]. Reza Rezaei,Zhenlong Wu,Yongqing Hou,Fuller W.Bazer,Guoyao Wu. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2016(04)
[7]奶牛酮病对奶牛生产性能的影响[J]. 李玉娟. 动物医学进展. 2016(04)
[8]浅析影响牛奶中乳蛋白、乳脂肪的因素[J]. 刘杰,马子馗. 黑龙江动物繁殖. 2012(03)
[9]二脂酰甘油酰基转移酶1基因的研究进展[J]. 刘文艳,王长法,仲跻峰,刘顺德. 中国畜牧兽医. 2010(07)
[10]饲料中可影响牛奶乳脂率的成分[J]. 董殿忠. 养殖技术顾问. 2010(06)
博士论文
[1]不同日粮模式及长链脂肪酸对奶牛乳腺乳脂合成的影响及其机理研究[D]. 张航.内蒙古农业大学 2014
硕士论文
[1]Kisspeptin-10对奶牛乳腺上皮细胞中CSN2合成的影响及机制[D]. 孙建华.吉林大学 2018
[2]NEFAs通过线粒体功能紊乱诱导奶牛肝细胞胰岛素抵抗的信号机制[D]. 高文文.吉林大学 2016
[3]奶牛乳腺上皮细胞凋亡周期性规律及机理[D]. 肖阳.东北农业大学 2012
本文编号：3355215
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪组织中脂肪酸(Fa)的动态循环
第二篇研究内容第2章高浓度NEFA对临床酮病奶牛乳蛋白合成的影响35图2.1临床酮病对奶牛乳腺中β-casein表达水平、JAK2/STAT5及mTOR信号通路重要分子磷酸化水平的影响。（A）β-casein、p-mTOR、mTOR、p-S6K1、S6K1、p-JAK2、JAK2、p-STAT5、STAT5、β-actin的蛋白Westernblotting结果。（B）β-casein的相对蛋白到达水平。（C-F）p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1、p-JAK2/JAK2、p-STAT5/STAT5蛋白的磷酸化比值。数据表示为平均值±SEM（n=15）。Fig.2.1Theeffectofclinicalketosisontheabundanceofβ-casein,thephosphorylationlevelofJAK2/STAT5andmTORsignalingpathwayonthebovinemammarygland.(A)Westernblottinganalysisofβ-casein,p-mTOR,mTOR,p-S6K1,S6K1p-JAK2,JAK2,p-STAT5andSTAT5.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C-F)Theratioofp-mTOR/mTOR,p-S6K1/S6K1,p-JAK2/JAK2andp-STAT5/STAT5inBMEC.Thedatawereexpressedasthemean±SEM(n=15pergroup).
第二篇研究内容第2章高浓度NEFA对临床酮病奶牛乳蛋白合成的影响362.3.2免疫荧光（IF）鉴定BMEC利用免疫荧光（IF）对分离培养的BMEC中的骨架蛋白CK-18的表达进行了检测。结果如图2.2显示，纯化后的细胞均高表达CK-18，表明分离纯化后用于实验的细胞为BMEC。图2.2免疫荧光检测BMEC中CK-18的表达（bar=10μm）。蓝光荧光部分为DAPI染色的细胞核，绿光荧光部分为染色的CK-18。Fig.2.2IFdetectstheexpressionofCK-18inBMEC（bar=10μm）。ThebluefluorescentpartisDAPIstainednucleusandthegreenfluorescentpartisstainedCK-18.2.3.3不同浓度NEFA对BMEC中β-casein的mRNA和蛋白表达量的影响在BMEC中添加不同浓度的NEFA，通过qRT-PCR和WesternBlotting技术，检测了BMEC中β-casein的mRNA丰度和蛋白表达量。结果显示，BMEC中β-casein的表达水平随添加的NEFA浓度的增加而减少（P<0.01,图2.3）。说明高浓度NEFA能够抑制BMEC中β-casein的表达。图2.3NEFA抑制BMEC中β-casein的表达。BMEC添加0,0.3,0.6,or1.2mM的NEFA处理24h。（A）β-casein蛋白的Westernblotting结果。（B）β-casein的相对蛋白表达水平。（C）β-caseinmRNA表达水平。Fig.2.3NEFAnegativelyregulatestheabundanceofβ-caseininBMEC.Thecellswereculturedwith0,0.3,0.6,or1.2mMNEFAfor24h.(A)Westernblottinganalysisofβ-caseininBMEC.(B)Relativeproteinabundanceofβ-casein.(C)RelativemRNAabundanceofβ-caseininBMEC.
【参考文献】：
期刊论文
[1]亚临床酮病对泌乳早期奶牛繁殖性能的影响[J]. 张锋,白云龙,宋玉锡,孙书函,夏成,徐闯,张洪友. 现代畜牧兽医. 2019(06)
[2]浅谈奶牛酮病与DHI数据的关系及其预防措施[J]. 翟卫爽,蒋业慧,李红燕,孙岩,田晓阳. 中国奶牛. 2018(07)
[3]上海地区奶牛产后低钙血症及酮病发病率调查[J]. 边四辈,黄克和. 中国畜牧杂志. 2018(01)
[4]奶牛围产期疾病的发病原因及预防措施[J]. 任卫青,周二艳,常瑶瑶. 当代畜牧. 2017(12)
[5]酮病对奶牛生产性能和繁殖性能的影响[J]. 朱奎玲,沈泰钰,于洪江,张子扬,高三思,许秋实,杨威,徐闯. 黑龙江畜牧兽医. 2017(04)
[6]Amino acids and mammary gland development:nutritional implications for milk production and neonatal growth[J]. Reza Rezaei,Zhenlong Wu,Yongqing Hou,Fuller W.Bazer,Guoyao Wu. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2016(04)
[7]奶牛酮病对奶牛生产性能的影响[J]. 李玉娟. 动物医学进展. 2016(04)
[8]浅析影响牛奶中乳蛋白、乳脂肪的因素[J]. 刘杰,马子馗. 黑龙江动物繁殖. 2012(03)
[9]二脂酰甘油酰基转移酶1基因的研究进展[J]. 刘文艳,王长法,仲跻峰,刘顺德. 中国畜牧兽医. 2010(07)
[10]饲料中可影响牛奶乳脂率的成分[J]. 董殿忠. 养殖技术顾问. 2010(06)
博士论文
[1]不同日粮模式及长链脂肪酸对奶牛乳腺乳脂合成的影响及其机理研究[D]. 张航.内蒙古农业大学 2014
硕士论文
[1]Kisspeptin-10对奶牛乳腺上皮细胞中CSN2合成的影响及机制[D]. 孙建华.吉林大学 2018
[2]NEFAs通过线粒体功能紊乱诱导奶牛肝细胞胰岛素抵抗的信号机制[D]. 高文文.吉林大学 2016
[3]奶牛乳腺上皮细胞凋亡周期性规律及机理[D]. 肖阳.东北农业大学 2012
本文编号：3355215
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