膜联蛋白A2通过调控BEFV基质蛋白的细胞膜定位促进病毒的释放

发布时间：2022-07-20 13:46

　　牛流行热病毒（Bovine ephemeral fever virus,BEFV）是引起牛流行热（Bovine ephemeral fever,BEF）的病原体,能够引起病牛高热、呼吸困难、奶牛产奶量下降、生育率下降等临床症状,给养牛业造成巨大损失,严重影响经济效益,农业部已于2014年将牛流行热列为重点防控的牛传染病之一。目前对于该病的防控主要以疫苗免疫为主,但防控效果不理想。因此,深入研究BEFV复制的分子机制,尤其是宿主蛋白与病毒蛋白相互作用调控病毒复制的机制,以期发现新的药物靶点,为抗病毒药物的研发提供新思路。膜联蛋白A2（Annexin A2,AnxA2）是一种Ca²⁺依赖的磷脂结合蛋白,参与调节胞吞、胞吐、膜结构域的形成、细胞增殖等,其N端结构域可影响该蛋白在细胞中的定位及功能,C端结构域是AnxA2蛋白与其它蛋白结合并发挥作用的基础。尽管AnxA2调控非洲猪瘟病毒等的复制,但尚未见AnxA2参与BEFV复制的报道。BEFV基质蛋白（M）,是由M基因编码的脂双层内膜蛋白,分布于病毒包膜与核衣壳之间。与BEFV同为弹状病毒科的狂犬病毒、水泡性口炎病毒等病... 

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 综述
    1 BEFV综述
        1.1 BEF简介
        1.2 BEF流行病学
        1.3 BEFV结构及其基因功能
        1.4 BEFV的复制机制
        1.5 BEF防控
    2 AnxA2 综述
        2.1 AnxA2 简述
        2.2 AnxA2 基因结构
        2.3 AnxA2 与病毒的关系
    3 研究目的及意义
第二章 AnxA2 促进BEFV的释放
    1 实验材料
        1.1 实验毒株和细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 mRNA水平的影响
        2.2 蛋白水平的验证
        2.3 过表达AnxA2对BEFV释放的影响
        2.4 沉默AnxA2对BEFV释放的影响
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 BEFV感染上调AnxA2 mRNA表达
        3.2 BEFV感染上调AnxA2 蛋白表达
        3.3 过表达AnxA2 促进BEFV的释放
        3.4 沉默AnxA2 抑制BEFV的释放
    4 讨论
第三章 AnxA2与BEFV M蛋白相互作用
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 M原核表达载体的构建及蛋白纯化
        2.2 AnxA2 基因引物设计
        2.3 GST-Pull down
        2.4 免疫共沉淀(Co-IP)
        2.5 AnxA2 蛋白结构域的划分
        2.6 AnxA2 缺失突变体引物的设计及表达载体的构建
        2.7 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 GST-Pull down检测发现,AnxA2与M蛋白存在相互作用
        3.2 免疫共沉淀验证AnxA2与M蛋白存在相互作用
        3.3 定位M与 AnxA2 蛋白的结合位点为第V段结构域
    4 讨论
第四章 M促进BEFV的释放
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 M蛋白对BEFV释放的影响
        2.2 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 M促进BEFV的释放
    4 讨论
第五章 AnxA2 通过调控M在细胞膜的定位促进BEFV的释放
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 膜蛋白与细胞组分分离实验
        2.2 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 AnxA2 促进M蛋白在细胞膜上的定位
        3.2 缺失AnxA2-V抑制BEFV的释放
    4 讨论
第六章 结论
参考文献
攻读学位期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛流行热的发病特点及防治办法[J]. 王炳会.  农民致富之友. 2015(12)
[2]牛流行热研究进展[J]. 李志,郑福英,王积栋,高闪电,殷宏.  中国畜牧兽医. 2015(03)
[3]Annexin A2在病毒感染中的作用[J]. 陈福旺,张田,曹宇航,杨鑫,逄大欣,欧阳红生,任林柱.  畜牧与兽医. 2012(S1)
[4]膜联蛋白的功能与调控研究进展[J]. 黄逸群,左开井.  生物技术进展. 2012(03)



本文编号：3664110