远志CYP88A85在酿酒酵母体内的功能研究
发布时间：2022-12-04 16:26
选题依据:远志Polygala tenuifolia是山西省道地药材之一,且全国需求量较大。远志皂苷是远志发挥益智作用的主要活性成分,属于齐墩果烷型五环三萜皂苷,结构复杂,单体化合物远志皂苷价格昂贵,难以获得,限制了该类成分的创新药物研发。酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae在适宜的环境下生长较快,尤其是在大型液体发酵罐中极容易生长,其DNA基因序列已知,故容易进行基因编辑,而且酵母体内具备合成萜类物质所需的前体化合物（2,3-环氧角鲨烯）的能力,该能力使酵母在合成生物学研究中占有了相当大的优势。上述特点使通过改造S.cerevisiae进而实现萜类的异源生物合成成为可能。因此,为了提高远志皂苷的产量,利用S.cerevisiae为底盘细胞进行萜类化合物的异源生物合成研究,是获得远志皂苷的新方法。天然产物的异源合成,为远志皂苷的开发提供了新思路,具体为:通过研究远志中合成远志皂苷的具有催化功能的CYP450（cytochrome P450,CYP450）,利用酶切或者同源重组技术构建基因表达盒或者目的片段,导入到具有表达基因的微生物细胞中,就能从微生物的代谢产物中获...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 立题背景及意义
1.2 课题的研究内容、技术路线图及创新点
1.2.1 研究内容
1.2.2 技术路线图
1.2.3 创新点
第二章 文献综述
2.1 植物细胞色素P450 分类
2.2 植物细胞色素P450 的功能
2.3 CYP450 在实际中的应用
2.4 植物CYP88 家族功能研究进展
2.5 植物 CYP88 族功能研究进展
第三章 CYP88A85 的生物信息学分析
3.1 实验方法
3.1.1 CYP88A85 基因序列的获得及生物信息学分析
3.1.2 构建CYP88A85 系统发育进化树
3.2 结果与分析
3.2.1 远志CYP88A85 基因序列分析
3.2.2 远志CYP88A85 蛋白序列分析
3.2.3 CYP88A85 氨基酸序列特征区域分析
3.2.4 CYP88A85 系统发育分析结果
3.3 讨论
第四章 远志CYP88A85 基因的时空表达
4.1 研究材料
4.1.1 供试植物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 研究方法
4.2.1 引物的设计与合成
4.2.2 CYP88A85 基因在不同年限远志中的表达
4.2.3 CYP88A85 基因在远志的根、茎、叶、花中的mRNA表达
4.2.4 数据处理
4.3 结果与分析
4.3.1 内参基因的引物特异性验证结果
4.3.2 CYP88A85 基因在不同年限远志及其不同组织中的mRNA表达分析
4.4 讨论
第五章 远志CYP88A85 基因在酿酒酵母体内的功能验证
5.1 研究材料
5.1.1 菌株与质粒
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器
5.1.4 培养基及常用溶液
5.2 研究方法
5.2.1 构建CYP88A85与CPR表达载体
5.2.2 双酶切及连接反应
5.2.3 转化、重组质粒的表达
5.2.4 酵母菌株构建及摇瓶培养
5.2.5 提取酵母代谢物
5.2.6 检测酵母代谢物
5.2.7 绘制对照品标准曲线
5.3 结果与分析
5.3.1 PCR扩增、产物检测及扩增产物回收纯化
5.3.2 远志CYP88A85 基因重组表达载体的检测
5.3.3 酿酒酵母代谢物的检测
5.4 讨论
第六章 总结与展望
6.1 研究工作总结
6.2 不足
6.3 展望
缩写词表
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
【参考文献】：
期刊论文
[1]小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选[J]. 丁苏芹,李玺,唐东芹. 南京林业大学学报(自然科学版). 2020(03)
[2]栽培远志qRT-PCR内参基因筛选与P450s基因的时空表达分析[J]. 李娟,孔冉冉,梅月菊,张福生,田洪岭,秦雪梅,杜晨晖,马存根. 中草药. 2019(24)
[3]细胞色素P450转化代谢甾体类化合物研究进展[J]. 朱进倩,刘吉华. 药物生物技术. 2019(05)
[4]柴胡总皂苷调控细胞色素P450酶发挥类似柴胡疏肝散抗抑郁作用研究[J]. 贺泽慧,范荣,张春虎,唐涛,崔寒尽,刘胥,梁清华,王杨. 湖南中医药大学学报. 2019(06)
[5]辐射影响细胞色素P450的研究进展[J]. 辛元尧,年永琼,李向阳. 药学研究. 2019(05)
[6]细胞色素P450氧化还原酶在发育中的作用[J]. 戴永国,赵艳娟,汪晖,郭喻. 武汉大学学报(医学版). 2019(03)
[7]细胞色素p450家族基因多态性与他莫昔芬临床疗效的关系[J]. 许馨元,蔡莉. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[8]黄芩化学成分对人细胞色素P4501A的抑制作用研究[J]. 涂东珠,马虹莹,王亚乔,赵晓华,郭文治,葛广波,杨凌. 中国中药杂志. 2019(03)
[9]花生四烯酸细胞色素P450代谢物在肾脏生理和疾病中的作用（英文）[J]. 方琴,陈光志,王炎,汪道文. 生理学报. 2018(06)
[10]细胞色素P450在植物三萜和甾醇骨架修饰中的功能研究进展[J]. 杨杰,詹亚光,肖佳雷,尹静. 中国科学:生命科学. 2018(10)
博士论文
[1]酿酒酵母中β-香树脂醇合成途径的构建与调控[D]. 张根林.北京理工大学 2015
[2]甘草酸对CYP450酶的影响及其机制研究[D]. 涂江华.中南大学 2010
硕士论文
[1]利用基因同源重组技术构建PtP450s的酿酒酵母在体功能研究体系[D]. 王倩玉.山西大学 2019
[2]远志皂苷生物合成关键酶CYP716A249在酿酒酵母中的功能鉴定[D]. 蒲雅洁.山西大学 2018
[3]基于高通量转录组测序与植物代谢组学技术研究远志皂苷生物合成途径[D]. 李晓伟.山西大学 2014
本文编号：3708602
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 立题背景及意义
1.2 课题的研究内容、技术路线图及创新点
1.2.1 研究内容
1.2.2 技术路线图
1.2.3 创新点
第二章 文献综述
2.1 植物细胞色素P450 分类
2.2 植物细胞色素P450 的功能
2.3 CYP450 在实际中的应用
2.4 植物CYP88 家族功能研究进展
2.5 植物 CYP88 族功能研究进展
第三章 CYP88A85 的生物信息学分析
3.1 实验方法
3.1.1 CYP88A85 基因序列的获得及生物信息学分析
3.1.2 构建CYP88A85 系统发育进化树
3.2 结果与分析
3.2.1 远志CYP88A85 基因序列分析
3.2.2 远志CYP88A85 蛋白序列分析
3.2.3 CYP88A85 氨基酸序列特征区域分析
3.2.4 CYP88A85 系统发育分析结果
3.3 讨论
第四章 远志CYP88A85 基因的时空表达
4.1 研究材料
4.1.1 供试植物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 研究方法
4.2.1 引物的设计与合成
4.2.2 CYP88A85 基因在不同年限远志中的表达
4.2.3 CYP88A85 基因在远志的根、茎、叶、花中的mRNA表达
4.2.4 数据处理
4.3 结果与分析
4.3.1 内参基因的引物特异性验证结果
4.3.2 CYP88A85 基因在不同年限远志及其不同组织中的mRNA表达分析
4.4 讨论
第五章 远志CYP88A85 基因在酿酒酵母体内的功能验证
5.1 研究材料
5.1.1 菌株与质粒
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器
5.1.4 培养基及常用溶液
5.2 研究方法
5.2.1 构建CYP88A85与CPR表达载体
5.2.2 双酶切及连接反应
5.2.3 转化、重组质粒的表达
5.2.4 酵母菌株构建及摇瓶培养
5.2.5 提取酵母代谢物
5.2.6 检测酵母代谢物
5.2.7 绘制对照品标准曲线
5.3 结果与分析
5.3.1 PCR扩增、产物检测及扩增产物回收纯化
5.3.2 远志CYP88A85 基因重组表达载体的检测
5.3.3 酿酒酵母代谢物的检测
5.4 讨论
第六章 总结与展望
6.1 研究工作总结
6.2 不足
6.3 展望
缩写词表
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
【参考文献】：
期刊论文
[1]小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选[J]. 丁苏芹,李玺,唐东芹. 南京林业大学学报(自然科学版). 2020(03)
[2]栽培远志qRT-PCR内参基因筛选与P450s基因的时空表达分析[J]. 李娟,孔冉冉,梅月菊,张福生,田洪岭,秦雪梅,杜晨晖,马存根. 中草药. 2019(24)
[3]细胞色素P450转化代谢甾体类化合物研究进展[J]. 朱进倩,刘吉华. 药物生物技术. 2019(05)
[4]柴胡总皂苷调控细胞色素P450酶发挥类似柴胡疏肝散抗抑郁作用研究[J]. 贺泽慧,范荣,张春虎,唐涛,崔寒尽,刘胥,梁清华,王杨. 湖南中医药大学学报. 2019(06)
[5]辐射影响细胞色素P450的研究进展[J]. 辛元尧,年永琼,李向阳. 药学研究. 2019(05)
[6]细胞色素P450氧化还原酶在发育中的作用[J]. 戴永国,赵艳娟,汪晖,郭喻. 武汉大学学报(医学版). 2019(03)
[7]细胞色素p450家族基因多态性与他莫昔芬临床疗效的关系[J]. 许馨元,蔡莉. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[8]黄芩化学成分对人细胞色素P4501A的抑制作用研究[J]. 涂东珠,马虹莹,王亚乔,赵晓华,郭文治,葛广波,杨凌. 中国中药杂志. 2019(03)
[9]花生四烯酸细胞色素P450代谢物在肾脏生理和疾病中的作用（英文）[J]. 方琴,陈光志,王炎,汪道文. 生理学报. 2018(06)
[10]细胞色素P450在植物三萜和甾醇骨架修饰中的功能研究进展[J]. 杨杰,詹亚光,肖佳雷,尹静. 中国科学:生命科学. 2018(10)
博士论文
[1]酿酒酵母中β-香树脂醇合成途径的构建与调控[D]. 张根林.北京理工大学 2015
[2]甘草酸对CYP450酶的影响及其机制研究[D]. 涂江华.中南大学 2010
硕士论文
[1]利用基因同源重组技术构建PtP450s的酿酒酵母在体功能研究体系[D]. 王倩玉.山西大学 2019
[2]远志皂苷生物合成关键酶CYP716A249在酿酒酵母中的功能鉴定[D]. 蒲雅洁.山西大学 2018
[3]基于高通量转录组测序与植物代谢组学技术研究远志皂苷生物合成途径[D]. 李晓伟.山西大学 2014
本文编号：3708602
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3708602.html