西北地区羊衣原体多样性研究

发布时间：2023-02-16 08:57

　　衣原体(Chlamydia spp)是一类革兰氏阴性、专性细胞内寄生、具有独特双相发育周期、可感染人和动物而引起多种传染性疾病的原核微生物。目前已在感染动物中发现流产衣原体、家畜衣原体、猪衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠衣原体等17个衣原体种类。自上世纪70年代在青海牧场牛羊群中发现有绵羊因感染衣原体而引起流产以来,目前已在国内多个省(区)先后有绵羊、山羊、猪和奶牛因感染衣原体引发流产疫病的报道。但此类报道主要是畜群内的血清流行病学调查和动物病例的个案分析,缺乏区域性或全国范围的分子流行病学调查研究,从而限制了对动物感染衣原体的预防措施或方法的科学制定和有效实施。本研究采集羊群阴道、直肠拭子,流产胎儿等样品、通过PCR基因扩增及测序分析,衣原体分离培养等技术手段对我国西北地区绵羊群和陕西关中地区山羊群感染的衣原体病原遗传多样性进行了调查研究。同时,利用分子生物学技术通过构建原核表达载体,在大肠杆菌中克隆表达了流产衣原体蛋白酶样活性因子(chlamydial protease like activity factor,CPAF)的全长编码基因,诱导获得其重组蛋白,为进一步建立动物感染流产衣原体的...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.衣原体概述
    2.衣原体与人和动物的健康
        2.1 沙眼衣原体
        2.2 鼠衣原体
        2.3 肺炎衣原体
        2.4 流产衣原体
        2.5 家畜衣原体
        2.6 鹦鹉热衣原体
        2.7 猪衣原体
        2.8 猫衣原体
        2.9 豚鼠衣原体
        2.10 其他衣原体
    3.衣原体的检测方法
        3.1 病原学检测
        3.2 血清学检测
        3.3 核酸检测
    4.流产衣原体的分型研究
        4.1 基于ompA基因序列的分型
        4.2 MLVA分型
        4.3 MLST分型
    5.结语和展望
第二章 西北地区绵羊衣原体多样性研究
    1.材料和方法
        1.1 试剂、菌种载体
        1.2 主要仪器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 样品采集
        1.5 样品DNA提取
        1.6 各衣原体种检测标准品的制备
        1.7 计算质粒拷贝数
        1.8 建立质粒标准曲线
        1.9 荧光定量PCR检测衣原体的引物和探针
        1.10 PCR扩增引物
        1.11 PCR反应体系及反应程序
        1.12 核酸电泳
        1.13 目的基因的回收测序
        1.14 系统发育分析
        1.15 MLVA分析
        1.16 MLST分析
        1.17 数据分析
    2.结果
        2.1 衣原体荧光定量PCR检测方法
        2.2 西北地区绵羊样品中衣原体的流行及分布情况
        2.3 流产衣原体和家畜衣原体的鉴定
        2.4 基于ompA序列的流产衣原体和家畜衣原体多样性分析
        2.5 流产衣原体流行菌株MLVA和 MLST分析
    3.讨论
第三章 陕西关中奶山羊衣原体多样性研究
    1.材料和方法
        1.1 细胞株、菌种、主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 样品采集
        1.4 衣原体菌株的分离
        1.5 衣原体菌株的细胞培养
        1.6 免疫荧光染色
    2.结果
        2.1 奶山羊衣原体检测
        2.2 奶山羊样品中衣原体种的鉴定
        2.3 基于ompA序列的奶山羊衣原体流行株多样性分析
        2.4 奶山羊流产衣原体流行菌株MLVA和 MLST分析
        2.5 奶山羊流产衣原体的分离培养
    3.讨论
第四章 流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达
    1.材料和方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2.结果与分析
        2.1 PCR扩增结果及重组原核表达载体的鉴定
        2.2 CPAF编码基因的序列分析及蛋白质的结构预测
        2.3 重组蛋白诱导表达条件的优化
        2.4 重组蛋白的Western Blot分析
    3.讨论
全文结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介
硕士期间已发表论文



本文编号：3743925