河北地区禽白血病流行病学调查与gp85蛋白表达及免疫效果评价

发布时间：2023-04-11 22:07

　　禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起对家禽危害较大的一种以垂直及水平方式进行传播的肿瘤性疾病。该病发病率为3%?5%,病程长,严重增加家禽养殖业的损失。目前对于该病没有有效的药物及疫苗。因此,本研究对河北地区AL展开流行病学调查,及主要流行亚群gp85基因进行了原核表达及真核表达,并对其进行了免疫效果的初步研究。研究内容和结果如下:1.河北地区种鸡ALV p27携带情况、流行亚群及其分子特征分析本研究通过对河北地区种鸡场采集种蛋和肛拭子样本(共包含6个地区的7个种鸡场3496份样品,其中地方品种2533份、引进品种159份、培育品种804份),利用p27抗原ELISA试剂盒检测ALV p27携带情况,结果显示2018-2019年河北地区种鸡场的阳性率达85.71%,个体平均阳性率达13.79%,地方品种阳性率达18.91%,引进品种阳性率为1.26%,培育品种阳性率仅为0.12%;采用PCR方法检测2018-2019年主要流行亚群,结果显示J亚群检出率为13.79%,E亚群检出率为13.70%,A亚群检出...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 禽白血病病原学
        1.1.1 ALV的分类
        1.1.2 ALV结构特征
        1.1.3 ALV理化特性
    1.2 ALV基因组及蛋白结构
        1.2.1 Gag基因编码的蛋白
        1.2.2 Pol基因编码的蛋白
        1.2.3 Env基因编码的蛋白
    1.3 AL流行病学
        1.3.1 AL的宿主范围
        1.3.2 ALV的传播途径
    1.4 AL的临床症状及病理变化
    1.5 AL的检测诊断方法
        1.5.1 病毒的分离鉴定
        1.5.2 酶联免疫吸附试验
        1.5.3 核酸斑点杂交试验
        1.5.4 免疫荧光技术
        1.5.5 快速检测试纸条
        1.5.6 PCR技术
    1.6 AL的防制
        1.6.1 灭活疫苗
        1.6.2 活疫苗
        1.6.3 基因工程疫苗
    1.7 本课题研究的目的及意义
第二章 河北地区种鸡ALVp27携带情况、流行亚群及分子特征分析
    2.1 试验材料
        2.1.1 样品来源
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 样品的处理
        2.2.2 样品中ALVp27抗原检测
        2.2.3 ALp27阳性样品亚群检测
        2.2.4 ALV-J gp85 分子特征分析
    2.3 结果
        2.3.1 ALVp27携带情况
        2.3.2 ALV亚群检测情况
        2.3.3 ALV-J gp85 序列分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 ALV-J囊膜蛋白gp85 原核表达及免疫效力评价
    3.1 试验材料
        3.1.1 菌株、表达载体、ALV-J病毒及试验动物
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂
    3.2 试验方法
        3.2.1 ALV基因组的提取
        3.2.2 ALV-J gp85 引物的设计及合成
        3.2.3 ALV-J gp85 基因克隆与纯化
        3.2.4 重组表达质粒pET-32a-gp85 的构建
        3.2.5 原核蛋白gp85 的表达及Western blot检测
        3.2.6 重组蛋白gp85特异性免疫效果测定
    3.3 结果
        3.3.1 gp85 基因克隆与原核表达质粒pET-32a-gp85 的构建
        3.3.2 重组蛋白gp85的表达验证
        3.3.3 pET-32a-gp85 蛋白表达的可溶性分析及纯化
        3.3.4 Western blot分析重组蛋白gp85 的免疫原性
        3.3.5 gp85蛋白免疫对雏鸡血清特异性抗体gp85的影响
        3.3.6 不同剂量免疫攻毒后鸡ALVp27阳性数及保护率分析
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 ALV-J gp85 真核蛋白在293T细胞中的表达及免疫效果评价
    4.1 试验材料
        4.1.1 质粒、病毒及细胞株
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 主要试剂
    4.2 试验方法
        4.2.1 引物的设计合成及gp85基因扩增
        4.2.2 pMD-18T-gp85 基因的克隆、测序
        4.2.3 重组质粒pEGFP-N1-gp85 的构建
        4.2.4 细胞转染
        4.2.5 pEGFP-N1-gp85 重组蛋白在293T细胞中的表达
        4.2.6 Western blot检测pEGFP-N1-gp85 的表达情况
        4.2.7 ALV-J gp85 真核蛋白的免疫效果评价
    4.3 结果
        4.3.1 ALV-J gp85 基因扩增
        4.3.2 重组质粒的双酶切鉴定
        4.3.3 pEGFP-N1-gp85在293T细胞中的表达
        4.3.4 Western blot分析pEGFP-N1-gp85在293T细胞中的表达
        4.3.5 血清抗体特异性检测
        4.3.6 血清抗体水平检测
        4.3.7 外周血T淋巴细胞转化率测定
        4.3.8 不同剂量免疫攻毒后鸡ALVp27阳性数及保护率
    4.4 讨论
    4.5 小结
全文总结
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
论文受资助情况
致谢



本文编号：3789843