柑橘黄龙病菌分泌蛋白05150的筛

发布时间：2021-08-14 19:10

　　【目的】柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）是柑橘产业的头号杀手,其病原主要是韧皮部杆菌属亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）,为革兰氏阴性菌,田间主要经亚洲柑橘木虱（Diaphorina citri）传播,为深入研究该病菌分泌蛋白的功能,笔者筛选其中1个分泌蛋白,进行原核表达并制备抗体。【方法】设定4点条件从Prasad等预测的166个分泌蛋白基因中筛选,与pET-28a构建重组表达载体,以原核表达的融合蛋白作为抗原,用于注射兔子,制备多克隆抗体。【结果】从预测的166个分泌蛋白基因中筛选出05150基因,成功构建表达载体pET-28a-05150,表达菌株pET-28a-05150在18℃、0.1 mmol·L^-1 IPTG浓度条件下诱导的目的蛋白为包涵体。获得的pET-28a-05150抗血清通过ELISA效价为1∶4 000,通过dot ELISA检测手段可与田间感病样品发生显色反应,通过Western blot能与融合蛋白杂交出特异性条带。【结论】该研究筛选了CLas的分泌蛋白基... 

【文章来源】：果树学报. 2020,37(09)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

RT-PCR间接验证感病柑橘中分泌蛋白05150的表达

获得的阳性单克隆经测序结果表明，阳性单克隆的05150片段大小正确，碱基无缺失、无突变发生，且编码框方向正确、无移位。NdeⅠ、XhoⅠ双酶切如图2-B所示，获得大小符合预期的2条目的条带，因此将测序和酶切验证正确的重组载体命名为p ET-28a-05150，作为原核表达的重组质粒。图3 来自6个CLas分离株的05150核苷酸序列的DNAMAN比对

来自6个CLas分离株的05150核苷酸序列的DNAMAN比对

【参考文献】：
期刊论文
[1]柑橘黄龙病菌在寄主体内含量动态变化研究[J]. 李智鹏,关巍,黄洋,杨玉文,赵廷昌.  果树学报. 2019(11)
[2]对柑橘黄龙病防控对策的再思考[J]. 周常勇.  植物保护. 2018(05)

博士论文
[1]稻瘟菌干扰水稻钾离子通道抑制免疫反应的分子机理研究[D]. 史学涛.中国农业科学院 2018
[2]柑橘黄龙病菌亚洲种全基因组测序及遗传多样性研究[D]. 娄兵海.西南大学 2018
[3]一、稻瘟菌效应子AvrPi9在水稻中互作蛋白的筛选与功能研究 二、组蛋白去乙酰化酶HDT701与Rpp30互作调控水稻免疫反应[D]. 熊叶辉.中国农业科学院 2016
[4]中国柑橘黄龙病病原调查、种群遗传分化及其原噬菌体溶菌酶蛋白原核表达[D]. 苏华楠.西南大学 2013

硕士论文
[1]柑橘黄龙病菌分泌蛋白Clsp33致病机理初步研究[D]. 刘雪禄.西南大学 2019
[2]中国柑橘黄龙病病原菌原噬菌体遗传多样性研究[D]. 谭锦.西南大学 2013
[3]应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布[D]. 胡浩.重庆大学 2007



本文编号：3343022