基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

发布时间：2023-02-12 19:16

　　【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株。再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性。采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性。【结果】成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25...

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 对硫磷抗原合成及单克隆抗体制备
        1.2.1 对硫磷半抗原、完全抗原合成及鉴定
        1.2.2 免疫方案及小鼠血清效价测定
        1.2.3 细胞融合与单克隆抗体筛选
        1.2.4 单克隆抗体制备及纯化
    1.3 对硫磷ic-ELISA建立
        1.3.1 抗原抗体最佳工作浓度筛选
        1.3.2 标准曲线建立
        1.3.3 特异性分析
        1.3.4 基质效应影响和方法准确性分析
        1.3.5 GC测定对硫磷含量
2 结果与分析
    2.1 人工抗原鉴定结果
    2.2 融合小鼠的筛选结果
    2.3 单克隆抗体的制备结果
    2.4 最佳抗原抗体工作浓度的筛选结果
    2.5 ic-ELISA检测对硫磷的标准曲线
    2.6 特异性分析结果
    2.7 实际样品检测结果
3 讨论
4 结论



本文编号：3741671