青杄转录因子PwHAP5及其同源蛋白AtHAP5下游靶基因的鉴定

发布时间：2023-11-26 14:42

　　利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体系酵母单杂交实验)显示A37、HSFA2启动子全长、只含有CCAAT box的区域均不能与PwHAP5和AtHAP5直接结合。EMSA试验结果表明,AtHAP5与A37和HSFA2启动子在体外不能直接结合;单(双)荧光素酶试验结果表明,AtHAP5对HSFA2具有负调控作用,但对A37表达无影响。通过RT-qPCR试验检测在异源过表达OE-PwHAP5植株中预测靶基因的表达量,结果显示A37与HSFA2相对表达量均无显著变化,而在同源过表达植株OE-AtHAP5中,HSFA2的相对表达量下降。这些结果显示AtHAP5在体内负调控HSFA2表达,而PwHAP5在进化上与AtHAP5的功能存在差异。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
2 结果与分析
    2.1 转录激活活性分析
    2.2 酵母单杂交试验
        2.2.1 pHis2体系酵母单杂交
        2.2.2 pAbAi体系酵母单杂交
    2.3 原核蛋白诱导纯化与EMSA试验
    2.4 荧光素酶试验
    2.5 基因水平验证调控作用
        2.5.1 AtHAP5各株系中AtHAP5、HSFA2、A37的表达
        2.5.2 PwHAP5各株系中PwHAP5、HSFA2、A37的表达
3 讨论
4 结论



本文编号：3867979